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标题:【讨论帖】PCR问题交流

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
怎样鉴定这个菌是我所要的菌呢？如何用PCR方法做啊？
我做的是结核菌
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ALALA[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Taq酶一般是800~2000bp/min  平均是1200bp/min 具体效率跟体系，PCR条件，及模板，引物有关，一般情况下按1000.1200bp/min计算延伸时间，短片段适当延长，一般最好不要少于30sec，长片段适当减短，若10k的3-5min足够了，2k的一般1min10sec到1min30sec就行
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近反转录的过程中遇到一件积极郁闷的事，开始做反转录pcr可以拉出目的片段（目的条带2100bp），可是过了一段时间怎么都p不出来了，我重新提了RNA，重新换了试剂，重新稀释了引物，可是还是拉布出来，但同样条件做的内参（750bp）每次都能p出来，目的片段就是拉不出来，而且每次都在100bp附近有模糊的条带，我是先将RNA用oligodT逆转录成cDNA，然后再用逆转录的cDNA为模板跑PCR，结果老是在100bp附近有条模糊的带————
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niangao1980[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你们谁有转基因方面的资料 分享下啊  我打算做工程菌啊
但是现在还是很迷惑     谢谢
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youreyes[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请教大家，我们做PCR实验共做了16条引物，8条探针的。前六条都能出峰，但是探针7、8不知道怎么回事就是不出峰，其它条件和前面的都是一样的，换了2套引物和2套探针结果都是一样的。探针7、8就是不出峰。想问问大家可能是什么原因？、、
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问一下 以cDNA为模板和以DNA为模板 用同一个引物PCR扩增时 退火温度一样吗
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发表于 2014-9-26 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问一下，延伸时间对pcr很重要吗？
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#甜#[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一个问题一直让我觉得很困惑：定量PCR和定性PCR之前的区别是什么？
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-9-26 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
虚心请教 如何看blast验证引物的结果 主要看哪些指标，是看连线？E值？还是其他的？ 谢谢了！
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feima+[使用道具]
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 小中大
我想请教高手，PCR扩增是，气溶胶污染怎么办？气溶胶的污染程度有多大？
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