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标题:【讨论帖】PCR问题交流

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发表于 2014-9-25 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢您的回答！还有就是我现在重新P，原来的条件竟然没有目的带了！
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发表于 2014-9-25 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
CDNA长度1900多！
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发表于 2014-9-25 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1000bp/min，保险起见，可适当延长时间
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发表于 2014-9-25 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你是以逆转录产物做模板扩增cDNA的话，你的条件要改改，你的延伸时间2分钟足够，退火温度放到50度就可以
那个-0.1度那步不要，没啥用，你一旦扩增出目的条带，把它回收了之后，以产物做模板提高退火温度再P一次
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发表于 2014-9-25 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Taq酶1kb一分钟吧
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发表于 2014-9-25 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请楼主帮忙回答一下这个问题，谢谢了
cuturl('http://ask.bbioo.com/ask/show-1922.html')
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发表于 2014-9-25 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位  我在PCR时  没加模板 可总是有带，我一共有20多对不同的引物，不加模板，几乎都有带，不知道为什么！我的引物是分装的，而且 基本排除了污染。请问，这种情况，有无道理？
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发表于 2014-9-25 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也有个问题想请教，昨天做PCR，20微升体系，目的片段一个是300bp左右，一个是2300bp（、我当时不知道），我选的延伸时间是1min，结果做完电泳后发现后一个目的片段有两条很亮的条带，一个大约就是2000多，另一个在200~300之间，我用的酶是Pyrobest，高手请帮忙解释一下为什么会出现这样的两条带？
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-9-25 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问一下，为何我的pcr产物检测时条带很浅，我已经设置了退火温度梯度，模板也是才提的，最近跑出的pcr条带一直很浅，请大家帮帮忙
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-9-25 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位  我在PCR时  没加模板 可总是有带，我一共有20多对不同的引物，不加模板，几乎都有带，不知道为什么！我的引物是分装的，而且 基本排除了污染。请问，这种情况，有无道理？

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我在做荧光定量PCR的时候也遇到过这种问题 后来觉得可能是由于荧光定量这种东西过于敏感 一点点模板就可能p出东西来 再有一点就是 可以试试把枪酒精消毒 再放到紫外下照 全面消毒 或者用带滤膜的枪头 有时候 枪和环境中一些残留的东西也会作为模板出现
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