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标题:【讨论帖】PCR问题交流

kswl870[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问问如果杂带很多应该是提高退火温度么？那么为什么？谢谢
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mnstyle[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
杂志太多，肯定是引物结合位点太多，也就是特异性不高，那就需要提高退火温度，增强特异性。
你最好试一下梯度PCR
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问LM-PCR的原理和应用？谢谢！
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.ISPCR中fish技术 是什么？

2.实时荧光定量PCR中，SYBR荧光染料渗入到双链时发光吗？？？还是等到PCR延伸到有荧光染料的时候才发光呢？请解释PCR产物增加同荧光素成正比的原理？

3.RACE技术和反向PCR有什么区别？我已经知道一段基因序列想要测得两端序列应该用哪一技术？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的是“荧光定量法做5种常用管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、18S核糖体RNA 、28S核糖体RNA、β - 2 -微球蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0在不同月龄籽鹅的不同组织中表达的稳定性研究”。

    学生想请教您：

    1、我用的是SYBR Green I法，在荧光定量时是否可以选择2-△Ct进行相对定量？

    2、如果能选择2-△Ct进行相对定量，如何使其其扩增效率为1？如何检测？应该注意哪些问题？
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发表于 2014-9-26 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，引物Tm值计算的问题，公式中的单价离子浓度，仅指K+浓度吗？要不要把Mg2+浓度算成2个K+的浓度。另外，不同的软件算同一引物的Tm值差别很大，请问以你的经验，哪种软件算的相对准确。
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发表于 2014-9-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有遇到过死活扩不出目的基因的情况，如何分析问题并解决？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上下游引物的GC含量不能相差太大，为什么？

用mix的话是不是就不用摸索条件了。

mix的优缺点有哪些？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上下游gc含量相差太大，会造成退火温度的不同，不利于你的扩增，同样，用mix你也得考虑到你的引物和模板的结合，设置适当的退火温度
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TNT[使用道具]
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发表于 2014-9-26 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问做microRNA怎样设计loop-stem引物啊？使用TaqMan探针
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