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标题:【求助】为什么细胞总也铺不匀？

xyw5[使用道具]
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发表于 2014-10-11 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么细胞总也铺不匀？


接种细胞到12或24孔板，细胞总是集中挤到孔的中央部分，怎么摇细胞也铺不匀，很苦恼，各位大侠有什么诀窍啊？多谢了。
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发表于 2014-10-11 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也碰到了这种情况，听别人介绍接种细胞前每个孔里先加少量培养液，接种后抖动培养板，效果好了一些，但问题还是没完全解决，还是有的地方没有细胞，不知道哪位大侠能介绍一下更好的方法啊？
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发表于 2014-10-11 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是否和细胞种类也有关系吧，我以前养MKN28，45也有这样，但现在cos－7很好，只要前后轻轻摇晃几下，在培养箱中再摇。
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发表于 2014-10-11 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做MTT的时候用的96孔版也有这样的问题，24孔回好一些，不过我觉得对实验结果的影响不是很大。如果做转染，现在有用DULE LUCIFERASE系统做校正，所以结果还可以。如果做MTT可能多做几组会好一些，其他的俺就没作过。因为不管做什么实验，之前是不是都要有一个优化细胞数量的问题，你有没有作过？
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ha111[使用道具]
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发表于 2014-10-11 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
经验之谈

细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下： 首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！ 如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。 这方面如有问题多联系！
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发表于 2014-10-11 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

果然不错。 不过我有疑问，为什么在24-well format中，细胞往往多集中于孔的边缘，而不是中间？
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junhun[使用道具]
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发表于 2014-10-11 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是这样做的：先在培养孔里加少许培养液，然后接种细胞，震荡，就象楼上所说，是左右的抖动，我是用手轻敲板子的边缘，然后很重要的一步是在平整的操作台上室温放置10-15分钟，然后到培养箱中培养，到贴壁时再看，绝对没有不均匀的现象。另外，取放板子的过程都要轻轻的，避免晃动。可以试试。
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any333[使用道具]
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发表于 2014-10-11 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你说的情况是少数，只需用吸管吸出再打进连续3－5次即可。
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-10-11 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下： 首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！ 如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。 这方面如有问题多联系！

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不错，多谢，我按你的方法做果然细胞很均匀！希望大家能多参加我们的论坛，介绍你们宝贵的经验，而这些经验在书本上是看不到的，但对于我们的试验又是很关键的！
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october7[使用道具]
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发表于 2014-10-11 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
果然不错。 不过我有疑问，为什么在24-well format中，细胞往往多集中于孔的边缘，而不是中间？

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你说的这种情况也很常见,前面我说过,在24孔板内的培养基较少,所以只需用吸管连续吸吹几次就可以了,吸的时候要连细胞一起吸完再打下去(动作不要过猛否则培养基会溅出). sorry,由于前几天本机子没装五笔所以打字很是困难,其实前面已发一贴是对你说的,只是忘了引用你的,不好意思!
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