【求助】AFLP预扩和选扩

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标题:【求助】AFLP预扩和选扩

quiqui008[使用道具]
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发表于 2014-10-28 10:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

开始做AFLP，总是结果不好，自己也找不出来到底什么原因，发上两个图，不知道有哪些高手做过，帮分析分析问题到底出在哪里呢，万分感谢啊！
需要的条带范围应该是在500一下的。用的Marker是2000的，最亮的那个750bp。第二个图中前四个是连接之后的，后四个是预扩图，第一个的图就是选扩了，不知道为什么全在点样口。

附件

2014-10-28 10:58

1201.jpg (29.3 KB)

utt0989[使用道具]
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发表于 2014-10-28 10:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

连接和预扩很正常，至于选扩，我可以很负责任的说告诉你是模板浓度太高导致PCR形成复杂产物，稀释吧，我曾经稀释到5万倍...呵呵，这个初试模板浓度稀释到100ng还是很重要的，不然后续只能大倍数稀释了

youreyes[使用道具]
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发表于 2014-10-28 10:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有一个选扩的问题，看来做AFLP的必经过程啊。
个人感觉是循环次数的问题，适当的下降吧。

bgf5[使用道具]
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发表于 2014-10-28 10:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也出现这些情况，我觉得可能是浓度太高，确实要稀释

mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-10-28 10:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，麻烦问下你点的什么Marker啊？连接完的电泳图和预扩电泳图不应该是弥散的吗？（试剂盒公司的人告诉我滴）我也不懂，学习一下！

quiqui008[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 mamamiya 于 2014-10-28 10:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，麻烦问下你点的什么Marker啊？连接完的电泳图和预扩电泳图不应该是弥散的吗？（试剂盒公司的人告诉我滴）我也不懂，学习一下！

我点的是东盛的2000的marker，连接完检测基本上看不见，预扩就是应该弥散的，这里的图是我原来做不出来，想找人求助的图，预扩估计还行，但是选扩就完全不行了。

mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 quiqui008 于 2014-10-28 11:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我点的是东盛的2000的marker，连接完检测基本上看不见，预扩就是应该弥散的，这里的图是我原来做不出来，想找人求助的图，预扩估计还行，但是选扩就完全不行了。 ...

哇~我是连接完能看到虚虚的带，但是预扩什么都木有，难道是接头没有连上？你们做AFLP是用的试剂盒还是自己配的试剂呀？

yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加样孔弥散的应该是模板浓度高了，稀释下吧

04906[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，麻烦问下你点的什么Marker啊？连接完的电泳图和预扩电泳图不应该是弥散的吗？（试剂盒公司的人告诉我滴）我也不懂，学习一下！

quiqui008[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 04906 于 2014-10-28 11:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，麻烦问下你点的什么Marker啊？连接完的电泳图和预扩电泳图不应该是弥散的吗？（试剂盒公司的人告诉我滴）我也不懂，学习一下！

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