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标题:【求助】PCR扩增不出条带怎么办？

zzzz[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR扩增不出条带怎么办？


各位高人，大家好！我刚开始做实验，有个问题很困惑，想请教一下：我在做从全血提取DNA，请生物公司设计合成引物后进行pcr,跑胶为什么有些能出现条带，有些不能，跑出的条带在目的条带范围内，也没有二聚体，跑不出的就什么都没有，不知道什么原因。谢谢！
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发表于 2014-10-28 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先，生物公司合成的引物也不一定就百分百成功啊。
其次，你提取DNA的质量怎么样，不敢保证。
再次，PCR条件可能不合适，需要优化一下，包括PCR的体系，如果有复杂结构，或是高GC序列，就需要用特殊的buffer了。
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发表于 2014-10-28 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PCR实验的成功,有很多因素,多做几次就好了!
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zzzz[使用道具]
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发表于 2014-10-28 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢啊，那我怎么测试一下模板或引物是否呢？刚开始做，什么都不懂，请多多指教。
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baidukk[使用道具]
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发表于 2014-10-28 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
只要你有目的条带出现，引物质量一般应该没问题。
模板可以找一对条件成熟的引物做一下试试。
其它的就要自己慢慢摸了，pcr说容易就容易，说难是很难，很难说了 呵呵
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-10-28 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

‘有些能出现条带，有些不能’可能是没有混匀。加好pcr体系各成分后要充分混匀，可以用手轻弹管壁几下，然后离心。
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zzzz[使用道具]
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发表于 2014-10-28 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！我再试试，前面做时就是没有离心。
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发表于 2014-10-28 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
离心很重要吗？真的什么都没有
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-10-28 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

体系是一定要混匀的，我们都是用震荡器震荡后再离心
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-10-28 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做一个单引物对照，有可能你做了梯度？
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