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标题:【求助】希望各路实验大仙们帮我看看这个图

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-10-28 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】希望各路实验大仙们帮我看看这个图


以下这张图，出现了这种模糊的原因我不知道是怎么了？我做的是issr,我试验快做完了但是就是这个引物有问题，p了几次了都不好，我不知道是什么问题，都是条带模糊，不清晰。

我想知道这是怎么了，我用的是三次不同电压，刚开始跑得慢后面慢慢变快，最后100伏，前后总共跑了2个小时20几分吧，我们实验室就是太上老君炼丹炉，人在里面都快化成水了，今天取胶出来胶面可热了，我想的是不是时间跑得太久？还是太热？
前一阵也是这样跑得一直不错，这就不知道咋回事了。。。哎，世界上最折磨人的事情莫过于做实验了，小的先在此谢过各位大神小仙，帮帮忙哈，助我快快完成这个实验，thanks a lot !


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2014-10-28 17:20
eric 2013-07-01 19hr 17min.jpg (33.31 KB)
 
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uaubc[使用道具]
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发表于 2014-10-28 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

扩增特异性不好呗，优化一下PCR条件嘛
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发表于 2014-10-28 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 uaubc 于 2014-10-28 17:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

扩增特异性不好呗，优化一下PCR条件嘛

这个条件我都是优化了一遍了，都不错，就这几天连续的用这条引物就是不行，哎，我在想是不是我稀释的DNA降解了，还是这条引物就不行，哎，着急的，就快做完了，把人直接耗到这儿了。。。
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发表于 2014-10-28 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是引物的问题，那建议你重新设计引物试试
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youreyes[使用道具]
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发表于 2014-10-28 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个ISSR有没有类似内参一样的可以做以下的？如果模版有问题，可以从内参看出来。如果模版没问题，应该是条件或者引物的问题吧。事实上如果这条引物总是出问题，那他就很有可能有问题
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-10-28 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重新稀释一管引物，换别人的模板
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baidukk[使用道具]
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发表于 2014-10-28 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.电压太高，跑得太快，就像彗星扫过地球大气层的时候会有美丽的拖尾现象
2.电泳胶要放冰箱30分钟后再拿出来跑胶
3.电泳液离子强度，PH值有改变，建议重新更换新的电泳液，或者调整电泳液的浓度
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