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标题:【求助】pcr产物克隆

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发表于 2014-10-29 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】pcr产物克隆

大侠们好，小弟打算做pcr产物克隆，不知道克隆对pcr产物有何要求？

用上图中的条带可以克隆吗？是要先测了序再克隆吗？


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2014-10-29 11:04
M@(Y6S~~[85@9C$XRZN23]7.jpg (24.75 KB)
 
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-10-29 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是PCR产物吗，没有maker呀，这个条带对吗？要做克隆，你加了酶切位点吗，最好再做个t载体的克隆
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发表于 2014-10-29 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个图也太不清晰了吧，建议你先连进T载体，再测序吧！
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发表于 2014-10-29 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是PCR产物吗，没有maker呀，这个条带对吗？要做克隆，你加了酶切位点吗，最好再做个t载体的克隆

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这是pcr产物，maker没有跑出来，条带有拖尾（不晓得要得不），没有加酶切位点，我没做过克隆所以先问一下。你有做克隆方面的资料吗？
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-10-29 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
条带看不清，做克隆的话条带必须清晰单一。
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发表于 2014-10-29 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dragonkilly 于 2014-10-29 11:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
条带看不清，做克隆的话条带必须清晰单一。

我用的kod fx酶，pcr每次都这样？应该怎么改进呢
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发表于 2014-10-29 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

条带清晰并且较亮，因为跑完胶你就要回收，回收浓度最好在15以上，然后连接T载体做转化，另外一定要确保你的酶会在PCR产物两端加A，你可以试试takara的高保真酶。
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-10-29 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的kod fx酶，pcr每次都这样？应该怎么改进呢

==========================================================================================================

我（们）的意思是，你再上传张清晰的放大的，这样就看好说了。若条带单一的话可以直接连接做克隆，然后送去测序；若要求不高，可以直接将PCR产物测序而不需要克隆步骤。
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3648755[使用道具]
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发表于 2014-10-29 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 IAM007 于 2014-10-29 11:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我用的kod fx酶，pcr每次都这样？应该怎么改进呢

==========================================================================================================

我（们）的意思是，你再上传张清晰的放大的，这样就看好说了 ...

之前pcr产物测过序，但是现在侧不起走咯才，做克隆的！
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-10-29 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PCR测序  除非是你的扩增片段特异性好。一般建议做好克隆再送测
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