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标题:【求助】长片段PCR扩增

call[使用道具]
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发表于 2014-10-29 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】长片段PCR扩增

大家好，
    我正在做长片段pcr扩增，以商品化的lambda 基因组DNA为模板，PCR扩增lambda16kb，PCR产物采用0.5%琼脂糖胶电泳，有一部分跑出来显示是目的条带，还有一部分留在胶孔内，未能跑出来，请问这是什么原因，而且随着扩增片段的增加，留在胶孔内亮度越大，跑出胶孔的量越少。


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2014-10-29 14:59
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是未跑出胶孔的样品，可以稀释一下产物重新跑一下电泳
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是蛋白吧，应该没事，你得到你想要的就行了。
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glass[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是DNA浓度太高
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是琼脂糖浓度还是高了，不如用0.3%或者更低的试试
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TNT[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有自己想要的东西  不影响你的扩增片段就好  应该不碍事的
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
和胶本身应该没关系，因为marker跑得很好；看起来也不太像是DNA浓度太高，因为条带的形状还是比较规则的；很有可能是有蛋白质污染，或者用的酶的量大了一点，你是说留在胶空里面的量与扩增片段的长度有关系？
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