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标题:【求助】如何扩增高GC含量的模板？

leifengta[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何扩增高GC含量的模板？

各位高手们注意了，我有个问题想请教大家！
本人之前一直在P富含GC的模板，使用了LA-Taq及其GC Buffer（本身含有DMSO和甘油）和slowdown pcr，都没有将其扩增出来。也重新设计了引物，仍然扩增不出。
我都不知道该怎么办了，哪位高手知道的话，帮忙啊
小弟不甚感激~
注：模板为链霉菌基因组
梯度和Touchdown PCR及热启动PCR都做过
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bgf5[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不要灰心哦，我的也是这样，只是还没有重新设计引物
加油啊，总有办法的
你还没有试增效剂是吧
可以考虑试一下哦
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不妨直接对GC段含量较高的部分进行序列合成，同时优化密码子，我遇到过你类似的问题，就是这样解决的。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看看这篇文章吧，“Universal method Facilitating the Amplification of extremely GC-Rich DNA Frangments from Genomic DNA” Anal. Chem. 2010,82,6303-6307. 我们实验室就用这个方法，还没有扩不出来的。
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
takara的la taq有个专门扩增高gc含量的，呵呵呵，我是扩增7500bp的，我的今天才买的，不知道效果怎么样，反正广告打得蛮好，可以试试看
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join[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问一下，如果按照那个程序但是不加那个7-deaza-dGTP的话效果怎么样呢
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