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标题:【求助】为什么我的引物跑出来两条条带呢？

+小生怕怕+[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么我的引物跑出来两条条带呢？

我的C2z2跑出来了两个条带，上面一条是我的目的片段，怎么回事呢？


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2014-10-29 15:28
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你这个是菌液检测吗？  我之前的菌液检测时有一个菌落也出现过类似的情况  怀疑可能是模板污染
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有杂带很正常。只要主带很亮就好。菌落PCR结果可信度不高，一般的话主带很亮，另外还有几条比主带大的杂带，是阳性的可能性较大。
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议提高退火温度      cuturl('http://www.bioclab.com/')
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bgf5[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据图上结果来看,明显是引物污染,建议楼主换引物再做.
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

试试提高退火温度
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

出现非特异性条带很正常的，出现这种现象的原意也是多方面的啊。你的目的条带也扩出来了，而且两条带也都很亮，之间也是分开的。这样切胶回收测序是没问题的。你也可以在把你的反应体系优化一下，减少模板量，减少Mg的量，减少Taq酶量，提高退火温度等等，可以再扩扩看看。
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能不是模板污染，这可看作一个概率问题，如果有模板污染，应该为少量，那么扩增出来的条带亮度应该明显比目的条带暗，但这个图片不是这样。另外，污染的模板与引物可以很好地匹配，并出现清晰条带，可能性不大。
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发表于 2014-10-29 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
退火温度每摸好
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-10-29 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这事引物的问题，我以前也出现过这种情况，引物的特异性不好
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