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标题:【求助】PCR水都扩出条带，是什么污染了吗

kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR水都扩出条带，是什么污染了吗

做半定量条带一直很亮，用水做了对照竟然也有条带，不知道哪里出了错
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那有可能是你的dNTP, 引物污染了
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喵咪[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kuaizige 于 2014-10-29 16:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
做半定量条带一直很亮，用水做了对照竟然也有条带，不知道哪里出了错

污染了
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发表于 2014-10-29 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前几天做也是这样，把所有东西全换了，引物再把母液重新稀释，移液枪用酒精擦拭消毒，还又换了个试验台去做，擦的干干净净，还用75%的酒精擦了一遍，先做空白对照，然后把PCR管的盖子盖上，嘿，就好啦，另外电泳点样的时候，把阴性对照点的离其他的远点，避免其他样品飘进去，如果你有时间，可以一个一个的排除看哪个试剂污染了
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
全部换了新的试剂，水里还是有条带，很整齐，位置跟目的条带一直，是引物自身有问题吗，做了退火温度梯度55，57，59，61只有61度的时候水里没条带，可目的条带也没有扩出来，请教了
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你引物换了吗？有可能是你的引物污染了模板，导致的
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物是用母液重新稀释的
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每一个组分都有可能被污染，没时间的话就都换一遍吧，还有那种带滤芯的枪头，可以防止枪对于溶液的污染
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很有可能是引物污染了，另外，实验室操作台附近的气溶胶污染也不能避免
重新合成引物，或者重新用干粉配置引物溶液。（水一定要干净的）
将枪的下半部分拆下来，用75%乙醇洗个5次
换一个地方操作。
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-10-29 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是实验室污染了。。。。。实验室经常做分子实验的话  就有可能会出现这种情况了
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