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标题:[未解决]关于Western实验的

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Sydney[使用道具]
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关于Western实验的

我的实验老是没有条带?大家帮 我想想是这么回事啊?
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随风飘[使用道具]
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回复 #1 Sydney 的帖子

这样说太笼统了,是做的那个实验啊,关于什么蛋白的?
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回复 #1 Sydney 的帖子

是不是一抗时间过长了啊?
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如何提高做实验的速度

如何提高做实验的速度


     做学生实验时大家一定很在乎邻桌的人做实验的快慢,自己这一组速度快结果好的时候心情最愉快。但是读了研究生,因为就是自己一个人做实验,没有了参照系,实验的速度问题就不再是个问题。

       其实,在一定的时间内如何做最多的事,始终是一件极其有意义的事。同样一件事,我们实验室有人做一个月,有人三、五天就搞定,差距甚大。我这里不探讨实验设计方案的好劣,就说说我当年是如何提高实验速度的。




       我在做学生实验的时候,经常第一个做完实验。一开始日本同学以为这是中国人特有的马虎劲。一次,有个叫“吉田”的同学和我一组做DNA测序实验,分工后他自己不干,全看着我干,看到我如何用量筒取去离子水时,发生了争论。我取水时,一般直奔约定量,多了就倒掉点,少了再补点,反正是十几秒钟的时间;而他取水时,装了80%满后就用洗瓶慢慢往里加(显然是为了精确),基本上要3分钟以上。于是我告诉他,“生物化学实验的误差一般是10%,而我这样取水误差觉得不会超过3-5%,你用过的移液管直列一会看看会有多少挂在壁上的液体流出来”。最后他很认真地做了测试,发现10毫升的移液管用后有0.45ml挂在壁上了。从此,他和他们不再认为我是“大马哈”了。




          以下是一些提高速度的小伎俩:1)多配些母液,有些不是母液的也当作母液配,比如做PCR时,可以将dNTP、缓冲液、引物等混合好,分装在PCR管子中后保存在-20度,用的时候只要加入模板DNA和Taq DNA聚合酶就可以了;2)做克隆期间,不管有没有用,晚上离开实验室前一定接种一管大肠杆菌,以便第二天突然要来做转化或提供给自己组里的别人用(往往会提高一天以上的速度);第一轮实验做上了,不管是不是已经得到克隆,一般再做上一轮(酶切、割胶回收和连接反应),以防不测,有时省2天时间;3)培养哺乳动物细胞时,尽量多留几孔细胞(反正培养基很便宜),而细胞则长得很慢,这样往往能节省几天的时间;4)可能用到的试剂尽可能提前订,尤其是实验室从来没有用过的试剂一定要提前数周订,因为还没有人知道要化多少时间呢;5)要用使用频率比较高的仪器时,提前写条子预约,只要你预定的时间带不在高峰期,大家还会感激你;6)自己制作些小工具来提高工作效率,比如浮子,小标签,等等。。。。。。

          勤奋的人可以想出更多好主意来提高实验速度。有一种努力劝大家一定不要做,就是直接造数据(尽管效率最高)。





对照实验是关键

对实验结果合理分析,以最少的实验进行验证

对实验成功的可能性的把握




      其实我个人觉得实验做得好不好,跟做的是否“先进”没有关系,跟仪器的关系也不是最大的,最大的决定因素在于你的实验是否高效,能否从一次实验结果分析判断出更多的信息,这其中的关键就在于设置对照。我作为师兄带过几届本科生和硕士生的实验,也和好多实验室交流过,发现好多人做实验不设对照,或者对照设置的不完善,这就导致了实验的效率很低,因为一次成功的运气不会一直陪伴你,总会遇到实验出问题的时候,这个时候找问题就要靠对照了,如果找不出来,那就是你的对照设置的还不到家;即使你总是一次成功,没有对照,也无法完美的解释结果,也就会找来审稿人变着法儿的问。当然不能认为对照是为了凑齐了发文章用得,我们写文章之前就要确立自己的思路——你要靠你完善的实验设计说服审稿人同意你的结论,而不是靠"先进"技术吓死审稿人,人家也算见过世面了,怎么会光看材料和方法就被镇住呢?




         对照设置是实验设计中相当重要的一环,许多人说这又什么难的,不就一个阴性一个阳性么?但在实验设计当中,应该考虑到所有有可能对结果造成影响的因素,能通过原理上的实验手段改变而避免的因素尽量改变实验手段,不能从原理上排除可能的因素,都要通过设置相应的对照来平行实验。这就要求一个综合的素质,你先要会技术有很深的认识(绝不是知道怎么做就行,更好知道为什么这么做)。有时看国外的实验做的很“漂亮”并不是手段先进,而是通过非常巧妙的对照设置,通过简单的手段就排除了各种不确定因素,结果自然而然的呈现在面前。因此对照的设置(严格来讲包括:干扰因素的考虑、对照的设置)可以说是一门艺术,反应了一个人的实验智慧,绝不是为了发文章,在你的实验组旁边加一个阴性一个阳性就好了。
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