小中大从你的CT值、溶解曲线单峰以及扩增曲线看，楼上解释的很清楚。这个位置很可能是引物二聚体而且模板没有有效扩增，可以拿qPCR产物跑琼脂糖电泳的条带与目的产物大小是否一致。另外，你用的是染料还是探针什么型号的PCR仪器，注意看这个染料是不是适合这台real-time仪器。我做qRT-PCR的一般策略是：提RNA，检测RNA完整性和纯度，反转录，模板验证（RT-PCR，用内参验证），引物验证（梯度PCR，找到最适退火温度），qRT-PCR（看溶解曲线、扩增曲线、CT值，数据分析），qRT-PCR产物电泳
