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标题:【求助】大家gelred是加在哪里呀?

079777chao[使用道具]
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【求助】大家gelred是加在哪里呀?

我们跑电泳的胶不加gelred,而是把gelred与loading buffer混合。不知道这样做好不好,求高手解释!另外大家实验室是怎么加gelred的呢?广泛征求做法!
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leifengta[使用道具]
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你gel-red是用多少比例与Loading buffer混合的啊?最近我也这样在实验,有时效果不是很理想,一直在是比例中。。。
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079777chao[使用道具]
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我都是买的试剂公司的,他们已经加好了,38rmb1ml
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ladyhuahua[使用道具]
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我当时用是加在microwave稍微凉凉后的胶里面,然后混合均匀就倒胶了。
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66小飞侠[使用道具]
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看一下说明书吧:

直接加载样品中比较节省燃料;

加入琼脂糖凝胶中是正常用法;

后染法的效果最好,但相对浪费一点;


看自己爱好了
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fox_79[使用道具]
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6
 
EB(溴化乙锭)到底有多毒?

随着每年各类化学物质进入市场,产生残留物的数量不断增加,健康和环境成为日益关注的问题。虽然许多实验中使用的化合物是有毒的,很多都是潜在的危险,但一些化学品没有适当的危险性分类,在日常实验中被广大科研工作者所忽略。

什么是EB溴化乙锭?
在研究数以千计的实验室残留性有毒物质,最值得一提的就是溴化乙锭(EB;3, 8-二氨基-5-乙基-6-phenylphenanthridinium甲基溴),该物质的潜在的毒性作用已被大众广泛的认知。EB属于核酸分子嵌入剂,通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中,特别是国内实验室都在使用EB进行凝胶核酸电泳实验的染色。

EB的诱变机制
众所周知,脱氧核糖核酸(DNA)是人体内一类重要的遗传物质, 许多小分子能与DNA 分子发生相互作用. 小分子物质与DNA 的作用, 影响到DNA分子的物理化学和生理性质, 从而影响DNA的转移和复制,进而影响生物遗传特性。而EB正是这种极易渗透细胞膜与胞内DNA嵌合的小分子,EB具有平面共轭大环结构,是典型的DNA 分子插入试剂, 菲啶环插入到DNA分子的碱基对之间, 与DNA嵌合形成稳定的复合物, 并影响DNA 的复制,破坏正常的遗传生理现象。

EB的危害
然而EB作为诱变性的化合物,它在人体中诱导突变的机制是不可逆转的。
科学家使用果蝇做为模式生物,将幼虫暴露在EB光照下15天,实验组果蝇分别出现不同程度的畸形: 如翅膀丢失,胸背部缺失等。另外研究人员表示,EB已经表现出严重的遗传毒理学伤害,作为致癌物质,对果蝇的诱变模式是可见的。操作分子实验的实验者,长期暴露在EB存在的环境中,可能出现的毒副作用,表现相对延迟,是一种潜移默化的致畸作用,严重影响遗传物质的稳定(详情Evaluation of the Effects of a Single Exposure to Ethidium Bromide in Drosophila melanogaster Diptera Drosophilidae Bull environ Contam Toxicol 2007.pdf)。
另外网络上有多数网友反映,周围长期进行生化实验的女性老师,都生产出不同程度畸形儿的现象。另外还有网友反映,有长期做凝胶实验的同事得白血病等。  

长期操作EB或者所处实验环境中有暴露的EB,都会对操作人员造成潜移默化危害,尤其是遗传方面。EB的废液处理不当,也对周围存在生物安全隐患,污染环境。

在此提醒广大EB操作者,及长期暴露在含EB工作环境中的科研人员,科研诚可贵,生命价更高! 不为自己着想,也要为下一代的希望着想,做好防护措施,规范操作。尽量远离EB---这个分子实验头号杀手!或者选择安全的EB替代品。
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leifengta[使用道具]
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7
 
楼主能用gelred已经很好了,我们实验室还是用EB,真有点担心
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pulala[使用道具]
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8
 
GelRed----真正安全无毒的核酸凝胶染料

GelRed and Gelgreen 核酸凝胶染料

最灵敏 , 最稳定的核酸凝胶染色试剂,是真正的EB替代产品!

由美国BIOTIUM公司技术专家研发的GelRed 和GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的高效荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。(下载美国Litron Laboratories, Inc. 完整安全检测报告)

目前大多数商业化的核酸染料(凝胶染色试剂)总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不完全令人满意:

EB (溴化乙啶)作为目前使用最广泛的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质。而且EB染色后具有较高的背景荧光信号。

SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I 。

Goldview从相似性对比试验结果来看,该产品就是AO(丫啶橙,一种剧毒产品,且荧光亮度不佳)。 请看下图Goldview 与 AO 对比试验结果(其中Goldview是从国内某公司采购,AO则来自SIGMA,报告来自开放生物)

GelRed/GelGreen 的特性:

1高灵敏度 :GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料
2稳定性极好 :可以使用微波炉加热,可以在室温下保存
3 更安全 :艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远远小于溴化乙锭 ( EB )
4 广泛的适应性 :适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色
5 染色过程简单 :与EB操作一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗
6 对 DNA 和 RNA 的迁移影响极小:对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I
7 与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容
使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时, GelRed 可以完美的替代 EB;
使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时, GelGreen 足以替代任意一种 SYBR 染料。

上海开放生物科技有限公司为美国Biotium产品中国区授权总代理(授权认证);
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