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标题:【求助】帮忙看下这个普通PCR电泳结果

purrr[使用道具]
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发表于 2014-11-29 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】帮忙看下这个普通PCR电泳结果

第二次增加循环到35，延伸时间增加一半，


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2014-11-29 10:16
棉花2mmmmm nnnnn2013-04-17 20hr 07min.jpg (37.7 KB)
 
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发表于 2014-11-29 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
解释下：目标条带大小约770，+1是的效果可以不管，主要是现在有非特异性条带


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2014-11-29 10:17
棉花电泳 -2013-04-19 16hr 50min.jpg (77.25 KB)
 
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发表于 2014-11-29 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的实验是做多态性吗？引物的特异性不强，调整一下退货温度试试
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发表于 2014-11-29 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 any333 于 2014-11-29 10:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的实验是做多态性吗？引物的特异性不强，调整一下退货温度试试

第二张图就是做的退火温度的梯度.....不知道现在这个状况我应该如何继续调体系呢？
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qiangren789[使用道具]
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发表于 2014-11-29 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想知道你实验做的是什么。比如是多态性，或者是阳性筛选。
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发表于 2014-11-29 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 qiangren789 于 2014-11-29 10:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我想知道你实验做的是什么。比如是多态性，或者是阳性筛选。

阳性筛选，植物的
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发表于 2014-11-29 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是阳性筛选，我建议你重新做一次。阳性筛选应该是一条目的条带，如果出现非特异性条带，可能是样品污染或者是假阳性。
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发表于 2014-11-29 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果做了几次以后还出现这种现象，就把目的片段拿出去测序，看看是不是连接的时候就出现错误了。
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发表于 2014-11-29 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 loli 于 2014-11-29 10:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
如果做了几次以后还出现这种现象，就把目的片段拿出去测序，看看是不是连接的时候就出现错误了。

还是比较确定是阳性，植株是用taq体系筛选的。现在用的是植物直接PCR试剂盒做的快检，正在调试体系.....样品污染几率比较小，做了好几次都一模一样，非特异性条带出现的位置都一模一样
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loli[使用道具]
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 小中大
我以前在做的时候也出现过，在做一次就没有了，可能是涂板时候污染了，或者是抗生素出现问题，这些都有可能。做实验的时候，注意一下细节，你应该能找到问题所在了。好运！
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