小中大应该是没有扩出来～这种情况是很正常的。如果你是新手，那考虑几个方面的问题
一、如果在同样的ｐｃｒ体系和实验条件下，阳性对照没有扩出来（可以找一其他人扩出来的，ｐｃｒ条件跟你差不多的模板来做ＰＣＲ），那就可以在 实验操作、实验试剂、实验条件、ＰＣＲ体系，ＰＣＲ程序等方面找原因。
二、如果如果在同样的ｐｃｒ体系和实验条件下，阳性对照扩出来了。
１、那就可以用梯度ＰＣＲ摸索你的ｐｃｒ的退火温度。
２、梯度ＰＣＲ失败后，要模板是否有问题。可以考虑重新提取模板。如果是新基因的话，不知道你是提ＲＮＡ，还是ＤＮＡ。（建议重新提取）
３、若还是没有成功。只能考虑重新换引物了。
