【求助】引物上酶切位点

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标题:【求助】引物上酶切位点

vera+[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我需要构建重组质粒，有两端目的基因（A、B）分别设计酶切位点：基因A：上游引物酶切位点EcoRⅠ 下游引物酶切位点 HpaⅠ

基因B：上游引物酶切位点HpaⅠ 下游引物酶切位点NheⅠ

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想要问一下，分别用什么适合的buffer啊

我要把目的基因分别连接到PMV361质粒上，再做表达

附件

2014-11-29 16:45

质粒PMV361.jpg (43.48 KB)

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发表于 2014-11-29 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

推荐你使用Fermentas的FastDigest 内切酶，所有酶都用一种Buffer。很方便，不用考虑兼容性问题。

qhyu[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

宝生物的产品目录上有公用buffer，去查查呗

wiwi[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用快酶切，非常方便的。

3N4G[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以下下来看看

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

跟我做的差不多，也是把两个目的片段插到一个质粒上去，求多交流！

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

每个公司的对应的buffer都不一样，所以想用什么buffer首先搞懂你用的酶是哪公司的，然后对应查找buffer表即可。

vera+[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

跟我做的差不多，也是把两个目的片段插到一个质粒上去，求多交流！

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我在做结核杆菌一段目的基因的PCR，
后期做表达，因此要P此片段全长。
想要加目的基因上游500bp，以及下游500bp
现在有个问题，NCBI上显示两个连续的基因中间差好多bp
我的问题是，我是直接在前面减500，后面加500，然后设计引物
还是，按基因的设计？

不知道表达清楚了没啊。。。

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-11-29 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我在做结核杆菌一段目的基因的PCR，
后期做表达，因此要P此片段全长。
想要加目的基因上游500bp，以及下 ...

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我也是刚弄这一块的，没什么经验，你可以重新发帖问问牛人。
我个人觉得还是应该重新进行引物设计保证一些。