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标题:【求助】3.2KB大小的条带的延伸时间

gemei0115[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】3.2KB大小的条带的延伸时间

这次要够个质粒，目的条带大概3.2KB吧，延伸时间大概1KB 1分钟，那我这3.2KB是不是要3.5min啊，哪位大侠求教求教…
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dream2013[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前做的是3.6kb左右的片段，延伸时间4min，用的是LA taq
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这主要是看你用什么酶，一般买酶的时候有说明书，你看看然后再根据自己片段多少来设计
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october7[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

具体的还要看你用的什么酶 Taq酶一般是一分钟1K，kapa酶2k,phusion酶15-30s就1K。四分钟怎么都足够了。三分钟也差不多，对于困难模板，延伸的要慢些。
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ALALA[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个跟你选用的酶和基因有很大关系，我用了两种酶，3.2KB的我通常在30秒就搞定了，你可以尝试下，我是基本能扩出来的。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

取决于你使用的酶。rtaq.至少四分钟。phusion ，60S绝对OK
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glass[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们这样大小的目的基因，基本上一分钟就可以了。但是可能用的酶不同，说明书也不一定很靠谱，你可以做对照实验撒。
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