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标题:【求助】你的电泳图在哪了？

qqshepherd[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】你的电泳图在哪了？

如何用血pcr？需要注意哪些 ？本人是新手 不懂啊 希望得到大家的帮助啊.

[ 本帖最后由 qqshepherd 于 2014-11-29 17:19 编辑 ]
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不清楚你说的是直接用血液一步进行PCR还是分步。我常用的是分步进行，用的是1×Buffer（含Mg离子）和蛋白酶K混合液10微升，加1微升的血（家畜和家禽的用量稍稍不同，可以通过调节蛋白酶K进行摸索），然后在55度消化0.5h,95度15min，然后消化液作为模板进行PCR，效果不错。除此之外，还有另外几种方法，效果也都不错，这一种试剂容易找。
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qqshepherd[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我今天做了几段人的新鲜血样基因 ，没扩出来几段，用的是Kapa的酶和以前正常PCR一样扩增的。具体模板怎么处理啊？今天的模板是我们的一个博士处理的，我先试了一下，不太理想。25微升体系加了0.25微升血液，加多了怕抑制剂多。
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发表于 2014-11-29 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

人血清处理方式一般是：加等量的DNA提取液混匀，然后煮沸10min左右，离心取上清。25微升体系加0.25微升模板太少了
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qqshepherd[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 66+77 于 2014-11-29 17:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

人血清处理方式一般是：加等量的DNA提取液混匀，然后煮沸10min左右，离心取上清。25微升体系加0.25微升模板太少了

他也是把血样煮过的，也没有沉淀，估计是离过心去掉细胞碎片了杂质了。昨天扩增35循环没出几个，后来又放pcr仪中扩增15循环，都出了。但是我用新鲜血液直接用kapa的blood buffer扩就没出呢。不知哪里出了问题，用血的buffer还要处理模板吗。
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

天根公司有从血液直接做PCR的试剂，挺好用的，可以联系一下。
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qqshepherd[使用道具]
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发表于 2014-11-29 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 birdfish 于 2014-11-29 17:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

天根公司有从血液直接做PCR的试剂，挺好用的，可以联系一下。

那血液用经过处理吗？我用的是Kapa 的blood buffer但是血液没处理 都没出
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发表于 2014-11-29 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2lou 方法较好
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