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标题:【求助】巢式PCR的原理及相关技术

kswl870[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】巢式PCR的原理及相关技术


我正在做巢式pcr，第一轮扩增时产物很好，我直接用第一轮的产物做模版进行第二轮扩增，结果第二轮扩增时出现很多杂带，我在想提高退火温度能不能减少杂带
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你怎么知道第一轮很好?
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hyuu[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也许用第一轮的产物来跑了次电泳
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dodoit[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

既然第一轮产物很好，干嘛还要进行第二轮？
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feima+[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能是模板量大了或者是退火温度低
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
稀释一下产物同时提高退火温度吧
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你第一轮空白对照在第二轮p的怎么样?我P老是有与正对照一致的条带，求解释？谢谢
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一轮效果好的话就没必要跑第二轮了，第二轮的话模板要稀释下再跑，有时杂带比较多
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vera+[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近在做这个，也老是没结果呢！
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flower@@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
巢式PCR是为了增加产物的特异性，如果你的第一轮产物很好，就没必要用巢式电泳。
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