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标题:【求助】降落PCR的目的是……

mnstyle[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】降落PCR的目的是……

上次pcr没有扩增到目的片段是因为退火温度不对呀！

          现在我用降落PCR扩增到了目的基因   

         1、大家看图，觉得我还需要进一步确定最适的准确的退火温度吗？
            那样是否必要呢？
            甚至我怀疑，有准确的退火温度吗？
          2、  我在50-55摄氏度和55-60之间的两次试验都成功了
            很奇怪呀
            退火温度不是在很窄的范围浮动吗？
          3、！！
            降落PCR的目的是扩增目的基因 还是寻找适宜的退火温度？？？
            （我的论文不是优化PCR反应条件）


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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

touch down 的应用是提高反应的特异性 在需要应用多态性来进行研究的实验中会比较合适
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发表于 2014-12-1 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
tuch down PCR的主要目的是用于获得目的基因的。
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发表于 2014-12-1 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有的时候没必要知道确切的退火温度，只要能扩增出目的片段就行。如果是做回收的话，就得知道它的退火温度，并进行优化，已得到最大的浓度
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mnstyle[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，我是准备回收。您看我的图，用了将近3h PCR出的浓度还可以吧？不用在优化PCR条件了吧？
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目的产物挺亮的，虽然有少量的非特异性产物，但做回收已经足够了。
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发表于 2014-12-1 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降落PCR对PCR仪有要求吗？加样时候有没有要求？看了这个方法我想试试看，哪位秀友能指点一二，小女子不胜感激。。。
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用降落pcr做的，退火温度比tm低了10度啊啊啊。。。
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