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标题:【求助】DNA琼脂糖电泳后的荧光条带怎么看？

966735obeng[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】DNA琼脂糖电泳后的荧光条带怎么看？


各位前辈，电泳条带有的模糊，有的没有，到底什么样子的条带才是正常的？请前辈们指教。
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S6044[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DNA琼脂糖电泳只是一种(分离DNA)的工具，我们通过它去定性（不是定量）地认识发现某些问题。因此，只要有条带，可以说明问题就行了。不要刻意地去追求，它只是一种工具。
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前不久我们也跑了DNA的琼脂糖凝胶电泳，效果出来也是有的清晰，有的模糊。但其实那就是预期的效果，所以你不必太在意什么带是正常的
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发表于 2014-12-1 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳条带就是有是比较清晰，有时比较模糊，这跟你你胶的浓度，厚度，以及电泳时间，还有目的物量的大小等因素有关系，所以有时比较模糊。当然要是不定量的话，模糊一点也没关系，要是下一步要做酶切，T克隆等的话，你就要定量了，此时若电泳条带还是比较模糊的话，你就要想想实验工程中哪些地方需要改进了。

我自己的一些看法，呵呵。
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966735obeng[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位前辈，意思就是说在荧光下有亮带出现，就能说明DNA的提取以及扩增都成功了，可有时候条带出来了，师姐说那不是的，是二聚体，这是怎么回事呢，还望各位前辈指点。
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ending[使用道具]
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发表于 2014-12-1 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

       聚体 是你的两个引物互相配对出来的引物二聚体，一般都会出现 不过可以使他的亮度降低，加样时要在冰上操作，还有PCR时，记着提前开机器，预热！
       出现片状拖带或涂抹带：
　　PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量，减少循环次数。
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966735obeng[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实我现在还没有做实验，只是偶尔去看其他人做，顺便问一下，电泳前，在一次性手套上用枪头滴几排的蓝色点滴，然后又将Pcr产物一个个的打匀，然后点胶，那个蓝色的是什么东西，染料吗？
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

loading buffer 两个作用：
1、里边的成分甘油帮助样品沉降入点样孔中，防止样品到处漂
2、里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，溴酚蓝条带的位置差不多相当于20bpDNA片段，二甲苯酚条带的位置相当于2KbpDNA片段。。。跑在最前面的是溴酚蓝。。。
另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位前辈能否给我说一下提取RNA时需要注意的事项，谈谈你们的经验，非常感谢！！
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hyuu[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二聚体 是你的两个引物互相配对出来的引物二聚体，一般都会出现 不过可以使他的亮度降低，加样时要在冰上操 ...

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前辈，我想请教一下，是否阴性对照也能产生引物二聚体呢？
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