【求助】做过5’RACE的请驻足帮帮我，耽误您几分钟

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标题:【求助】做过5’RACE的请驻足帮帮我，耽误您几分钟

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如题，我要做两个基因，如X1和X2（一个系列的两个构型，暂且这么叫吧），X1的全长做出来了，X2的5’没做出来，因为X1和X2的核心序列太相似了，每次扩X2的5’，虽然条带比较单一，但是测序都是X1的，做了3个月了，一点进展没有，实在是没办法了，请各位大神帮帮忙啊

dodoit[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你就找不相似的、特异性的序列设计引物啊，设计两个巢式引物，一个outer，一个inner试试。

yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

两个方法，一个是巢式，另一个是加长下游特异性引物长度

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你就找不相似的、特异性的序列设计引物啊，设计两个巢式引物，一个outer，一个inner试试。

=======================================

你的意思是用软件设计还是自己找序列设计引物啊？

flower@@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 tangxin_80 于 2014-12-1 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你就找不相似的、特异性的序列设计引物啊，设计两个巢式引物，一个outer，一个inner试试。

=======================================

你的意思是用软件设计还是自己找序列设计引物啊？ ...

楼主，做5’用什么做的？提RNA提的效果怎么样？我也在做RACE，但是老提不了好的RNA，不知道怎么回事，能不能提点建议？我提的是动物组织的，想问下提RNA能用试剂盒吗，现在无计可施了已经。

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 flower@@ 于 2014-12-1 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，做5’用什么做的？提RNA提的效果怎么样？我也在做RACE，但是老提不了好的RNA，不知道怎么回事，能不能提点建议？我提的是动物组织的，想问下提RNA能用试剂盒吗，现在无计可施了已经。 ...

size=2]做全长。我提的也不好，直接往下做，也做出来了一部分。先查文献，看要做的基因在哪个组织表达量高，就在那个组织提RNA，多提几份，取最好的[那份做RACE，祝成功。
ps 不好意思，账号一直不能用,回复的比较晚

flower@@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 tangxin_80 于 2014-12-1 15:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

size=2]做全长。我提的也不好，直接往下做，也做出来了一部分。先查文献，看要做的基因在哪个组织表达量高，就在那个组织提RNA，多提几份，取最好的[那份做RACE，祝成功。
ps 不好意思，账号一直不能用,回复的比较晚
...

您5‘端用试剂盒提的么？我是在高表达的组织里提的，5’端不好做，提的RNA感觉效果不好，反正是出不来。郁闷的很。

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 flower@@ 于 2014-12-1 15:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您5‘端用试剂盒提的么？我是在高表达的组织里提的，5’端不好做，提的RNA感觉效果不好，反正是出不来。郁闷的很。

是啊，我用的TAKARA的，做不出来可以换个试剂盒
做出来的5‘端是在高表达的组织做出来的，没做出来的5’端，我之前没做组织分布所以不确定是不是高表达的组织。
确实不好做，一起加油吧

喵咪[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你应该有X1和X2的靠近5端的中间序列吧，找到差异部分设计下游引物