【求助】关于热启动

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标题:【求助】关于热启动

@花开花落@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在传统的pcr反应中，极易发生引物错配和二聚体的形成，继而导致非特异性产物的扩增。热启动方法的问世有效地解决了这些问题，不仅优化了目标扩增产物，同时也减少了非特异性扩增，而且使得在传统PCR技术中较难扩增的单拷贝基因以及超长片段变得更简便。
金思德 E1000-PCR仪是目前市场上唯一具有热启动功能的PCR仪，它主要是通过物理方法实现的热启动，能够在不使用昂贵的热启动酶的条件下，就可以有效地减少反应中非特异性产物的产生。
经实验室的研究结果表明，通过使用E1000-PCR仪的热启动功能，能够有效地帮助实验人员在做较难扩增的目标产物时得到最佳的实验结果，减少实验摸索时间，快速解决问题。

附件

2014-12-1 15:31

e-1000.jpg (24.11 KB)

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发表于 2014-12-1 15:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

啥？？你配样是都是在pcr仪外配的，所谓热启动是说配样时抑制pcr反应（你机子怎么抑制？？），反应时恢复反应，你这有点乱扯吧

@花开花落@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 66+77 的帖子

您好，这就是我们新研发出来的PCR，它采用的是物理方式的热启动！~实验方面我们已经反复做了很多次了，绝对没有问题！~

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发表于 2014-12-1 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 @花开花落@ 于 2014-12-1 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
您好，这就是我们新研发出来的PCR，它采用的是物理方式的热启动！~实验方面我们已经反复做了很多次了，绝对没有问题！~

真有那么神，可否请教下其中的原理？物理方式目前主要是低温配样，难道你们是说要在pcr仪上配样？？

@花开花落@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 66+77 于 2014-12-1 15:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

真有那么神，可否请教下其中的原理？物理方式目前主要是低温配样，难道你们是说要在pcr仪上配样？？

实例：
PCR扩增目的基因：Human dystrophin gene, Alu7-2 repeat。
PCR扩增片段大小：320bp。
PCR的反应体系：25ul体系，包含模板DNA（人基因组DNA）-1ul；上下游引物各0.5ul；dNTP -0.5ul；Buffer -2.5 ul；Taq酶0.25 ul；ddH2O-19.75ul。
PCR的反应条件：94℃ 2min; 94℃ 50s,67℃1min,72℃ 2min,42cycles;72℃ 10min;4℃∞。
热启动的操作步骤：
1. 打开E1000-PPCR仪，建立实验方法条件；
2. 选择热启动模式；
3. 仪器加热板升温，待仪器升温至80℃；
4. 打开仪器热盖，将空的PCR管放置于热板上；
5. 依次将反应体系中各组分加入PCR管中；
6. 合上热盖，点击“Run”按钮，开始运行。
PCR产物电泳结果：
（1）PCR反应体系中含有普通的Taq酶：

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发表于 2014-12-1 15:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图1为热启动方式下的PCR产物电泳结果；图2为传统启动方式下的PCR产物电泳结果，两种启动方式下的反应的体系及条件均一致。
从图中可见，热启动方式下的PCR产物的电泳结果较为理想，目的条带清晰，非
特异性条带较少，且条带拖尾现象较弱；而传统启动方式下的PCR产物的电泳结果就
不是十分的理想，虽可见目的条带，但条带较为模糊，拖尾现象较为严重。

@花开花落@[使用道具]
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发表于 2014-12-1 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

（2）PCR反应体系中含有Taq-plus酶：

图3                                  图4
图3为热启动方式下的PCR产物电泳结果；图4为传统启动方式下的PCR产物电泳结果，两种启动方式下的反应的体系及条件均一致。
从图中可见，热启动方式比传统启动方式下的PCR产物的电泳结果更为理想，目
的片段扩增更加清晰，非特异性条带亮度较弱。
（3）PCR反应体系中含有热启动酶：

图5                                  图6
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2013-2-23 11:00 上传
图5为热启动方式下的PCR产物电泳结果；图6为传统启动方式下的PCR产物电泳结果，两种启动方式下的反应的体系及条件均一致。
从图中可见，热启动方式比传统启动方式下的PCR产物的电泳结果较为理想，目的条
带清晰且亮度明显，非特异性产物明显减弱。

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发表于 2014-12-1 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的神啊这种方式几乎所有pcr仪都能做到啦

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发表于 2014-12-1 15:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 3648755 于 2014-12-1 15:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的神啊这种方式几乎所有pcr仪都能做到啦

您好，我们只是说我们的仪器可以做到更好！~

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小中大

嗯到这想必大家很清楚你的热启动机子怎么工作的了谢谢！