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标题:【求助】 荧光定量PCR Ct值很高，都是30几，怎么办 ？

gemei0115[使用道具]
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发表于 2014-12-1 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 荧光定量PCR Ct值很高，都是30几，怎么办 ？

大家好，最近在做荧光定量pcr，发现我用cDNA原液直接上定量，结果Ct值很高，都是30几，这样的话，结果是不是很不好呀，，我想问下，怎样可以使Ct值变小呀？

可以通过增加模板量使Ct值变小吗？
或者可以通过优化什么条件可以使Ct值变小呀？

希望有经验的可以帮帮忙，我很困惑！因为cDNA浓度没法加大了，真不知道该怎么办呢？
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-12-1 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
扩增效率怎么样啊？
试着摸索最佳反应体系和条件啊~
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-12-1 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是这个基因的表达量太低了吧
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baidukk[使用道具]
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发表于 2014-12-1 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
表达量太低，或者你的RNA到CDNA时的模版浓度太低了，看看引物是不是不够特异，用看家基因做一次看看CT值怎么样，还是这么高就重新准备模版吧
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2014-12-1 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
回楼上，看家基因大概在25左右，可能是表达量低吧
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