【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题

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标题:【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题

DDD[使用道具]
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发表于 2014-12-4 11:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

文献上说来自电鳗的乙酰胆碱酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein)，请问它的单位是什么意思啊？

还有就是我如果购买500U/mg 的酶（或者是2000U/ mg) ，那么如何将它配制成1000U/mL的溶液呢？是直接用去离子水溶解还是其他什么缓冲液啊？

一般酶溶液制备后能存放多久呢？

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发表于 2014-12-4 11:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 kent 于 2014-12-4 11:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
第一个问题在网络或课本上很容易查到，以后不许偷懒啊，呵呵。U----酶活力的度量单位。1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔 ...

呵呵，非常感谢你的帮助！我明天正好就要去配酶溶液了呵呵，你的回复真及时真好~哈哈
谢谢你！我已经明白啦！呵呵，以后我不偷懒了，得好好做实验好好查文献好好学习~(*^__^*) 嘻嘻……

pulala[使用道具]
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发表于 2014-12-4 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 DDD 于 2014-12-4 11:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

呵呵，非常感谢你的帮助！我明天正好就要去配酶溶液了呵呵，你的回复真及时真好~哈哈
谢谢你！我已经明白啦！呵呵，以后我不偷懒了，得好好做实验好好查文献好好学习~(*^__^*) 嘻嘻…… ...

楼主，想请问下你，你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液，而且浓度多大比较合适啊？

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发表于 2014-12-4 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 pulala 于 2014-12-4 11:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，想请问下你，你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液，而且浓度多大比较合适啊？

10 U/mL储备液：将500 U/mg的AChE灰白色固体粉末用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得；
0.22 U/mL工作液：取220 μL的10 U/mL储备液，用缓冲液B溶解，定容至10 mL量瓶中，摇匀即得。

其中，缓冲液A：50 mM Tris-HCl，pH 8.0；
称取3.03 g Tris，精密称定，加入到375 mL去离子水中，在电磁搅拌下滴加浓盐酸至pH 8.0 (25℃)，再向其中加入去离子水，定容至500 mL量瓶中，即得。
缓冲液B：50 mM Tris-HCl，pH 8.0，含有0.1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），用来稳定酶；
称取0.05 g BSA，精密称定后用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得（注意BSA容易产生气泡，所以定容时不要剧烈振摇，要轻轻操作，防止产生气泡）。

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发表于 2014-12-4 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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10U/mL的储备液我用具塞塑料试管分装后冻存于-20°冰箱中。

feima+[使用道具]
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发表于 2014-12-4 11:06 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 DDD 于 2014-12-4 11:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

10U/mL的储备液我用具塞塑料试管分装后冻存于-20°冰箱中。

楼主，虽然时间好久了，还是希望你可以帮忙解答一下，我发现你在缓冲液A中没有加小牛血清白蛋白呢，为什么不加到缓冲液A中，这样缓冲液B就不用每次稀释用的时候都加了啊

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原帖由 feima+ 于 2014-12-4 11:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，虽然时间好久了，还是希望你可以帮忙解答一下，我发现你在缓冲液A中没有加小牛血清白蛋白呢，为什么不加到缓冲液A中，这样缓冲液B就不用每次稀释用的时候都加了啊 ...

这个问题我没有具体探究，因为我也是参考了大量文献总结的实验方案。个人认为蛋白的冻存与复苏对酶有所影响吧！缓冲盐B在实验过程中稳定酶，在存放过程中就没有必要加入了。

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发表于 2014-12-4 11:07 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 DDD 于 2014-12-4 11:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

10 U/mL储备液：将500 U/mg的AChE灰白色固体粉末用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得；
0.22 U/mL工作液：取220 μL的10 U/mL储备液，用缓冲液B溶解，定容至10 mL量瓶中，摇匀即得。

其中，缓冲液A：50 mM Tris-HCl，pH 8.0；
称取 ...

楼主，你配酶溶液时用的容量瓶是经过高温灭菌的吗？用的缓冲液A和B有没有灭菌呢？是过滤灭菌还是高温高压灭菌？我刚开始接触酶，实验室也没人用过，还请不吝赐教。

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发表于 2014-12-4 11:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，你配制缓冲溶液时是用的超纯水还是普通的三次水啊

DDD[使用道具]
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发表于 2014-12-4 11:08 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 rxcc33 于 2014-12-4 11:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，你配酶溶液时用的容量瓶是经过高温灭菌的吗？用的缓冲液A和B有没有灭菌呢？是过滤灭菌还是高温高压灭菌？我刚开始接触酶，实验室也没人用过，还请不吝赐教。 ...

我没有灭菌，一直都是放冰箱冷冻起来的，现用现配。

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