【讨论帖】细胞培养基本问题 - 经验共享

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标题:【讨论帖】细胞培养基本问题

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞之接种密度为何？

园丁##[使用道具]
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小中大

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原帖由 yueban-1147 于 2014-12-4 15:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
细胞之接种密度为何？

依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

#甜#[使用道具]
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小中大

细胞冷冻培养基之成份为何？

园丁##[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 #甜# 于 2014-12-4 15:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
细胞冷冻培养基之成份为何？

动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。

redbutterfly[使用道具]
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小中大

DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？

园丁##[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:14 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 redbutterfly 于 2014-12-4 15:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？

冷冻保存使用之DMSO 等级，必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。

leifengta[使用道具]
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冷冻保存细胞之方法？

ha111[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:14 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 leifengta 于 2014-12-4 15:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？

园丁##[使用道具]
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发表于 2014-12-4 15:15 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 vvmmoy 于 2014-12-4 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？

冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。

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