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标题:【求助】 293T细胞用lipo2000转染后死亡很多

junhun[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议用Roche的X-trem Gene 9 or HP Transfection reagent,细胞不死 转染效率高。针对293T贴壁不牢 建议用 Poly D-lysine 将培养板或者培养皿处理，这样一般不会掉了。我前两天才用Roche的X-trem HP做过293T的转染，效率还高以 至少60%~ 祝好
Lipo 2000大面积细胞会死亡的 但是我前不久转一个难转的细胞 发现它对那个一点杀伤力也没有但是也没有转进去。
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发表于 2014-12-5 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你说的培养基预热时在培养箱里面预热还是在水浴啊？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，我现在也是在做这方面，我遇到一个问题，看荧光的时候如果日光灯开着就看到绿色荧光，如果把灯关了就看不到了，不知道你有没有遇到这种情况
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢大家讨论！

我最近正在做MCF10A细胞系的转染实验呢，也是一片一片的死去 T_T 等会儿我再试试用高密度细胞转染，以及培养基预热。说的也是，转染过后的细胞极其脆弱，不如平时的时候抗折腾。
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，我现在也是在做这方面，我遇到一个问题，看荧光的时候如果日光灯开着就看到绿色荧光，如果把灯关了就 ...

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你那个有可能不是真的荧光……只是某反光物透过滤光片。你试试看用红色或者紫色蓝色绿光片是否都能看到它？荧光的话，通常情况下只要有激发光源（那个一般不太是日光灯），在全暗的情况能看到。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换一下转染试剂试试，加我QQ727750080，免费试用美国SignaGen的转染试剂。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我转染时没有换成DMEM培养基，而是直接在FBS培养基中进行的转染，照样能够把效率提到90%。转染时细胞密度控制在60%~80&即可，不需要上面要求的90%以上
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在补充一下，我用的是293T细胞
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555444[使用道具]
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发表于 2014-12-5 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问一下大家，pCMV-myc这个载体可以在cos-7细胞中表达吗?选择在哪种载体里表达有啥讲究吗
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