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标题:【求助】感受态与质粒转化

eric930[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主放四度真是难以想象，感受态制备时要一直保持低温，冰上进行。感受态做好后最好液氮速冻，然后放负八十。转化的时候从负八十拿出来冰上融化。一直放四度的话还有效率吗？
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uaubc[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是-80度吧！
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any333[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

转化后，记得要在无抗的LB中摇1h左右，让质粒抗性基因表达。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很难说，重新做一次吧
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BUK[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是一楼所说，制备的感受态细胞出现问题……加入甘油后，短期可保存在-20℃冰箱中……
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感受态要-80度保存，用时取出后立即冰浴，不能放在4度
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she[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感受态出问题了。
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she[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
制备好的感受态一定要放-80℃保存吗，即使不是批量做，第二天就要做质粒转化？-80℃的感受态取出来化冻就 ...

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除非立刻要做转化，不然我们都会保存到-80℃。对啊，化冻就直接加构建的质粒了，按照转化步骤进行了。我们一直这样做的，所以不知道你说转化率的高低是与哪种方法进行比较呃。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-12-6 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议你还是买商品化的感受态吧，自己做的就算阳性能长出来，效率却未必满意，尤其连接效率不是很高的情况下更是明显，而且商品化的感受态也不很贵，最重要的是节省实验的时间
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