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标题:【求助】我碰到一个非常头疼的灵敏度降低的问题

xyw5[使用道具]
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发表于 2014-12-8 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我碰到一个非常头疼的灵敏度降低的问题

不好意思，我还是个新手，大学刚毕业，才在液质这里混了几个月，刚学到一点点皮毛，如有不对请各位多
多指教啊。
我最近在做氯霉素的检测，仪器是Sparatons Module 2695和Micromass Quattro Ultima Pt联用，采用
Waters Atlantis的柱子。在4月初的时候，通过一段时间的摸索优化和高手的指导，把氯霉素的LOD做到
0.003ppb的水平。我对峰面积的数据记录得比较清楚，以下我都用1ng/mL浓度，进样10uL的溶液来说吧。
0.003ppb水平的峰面积在12万左右，这个状态保持了1个星期。在这之前，峰面积没有低于5万过。后来为了
准备一门考试，我休息了10天，在这10天里，单位里搞了青霉素和苏丹红的检测。等我回来看的时候，我的
乙腈已经被加入了0.1%甲酸。而且做青霉素的那人也和我用同一个柱子。这时我又进了同一个样品，出来的
峰面积只有3000左右。因为我用的是ESI- 离子源，所以基本认为是酸性物质影响我的离子化。我换上干净的
乙腈并冲洗了柱子，峰面积只上升到6000。 接下来我又做了以下工作 1、为了确认是否是酸性物质的干扰，我又搞了一瓶乙腈，加入0.1%氨水，此时峰面积上升到9000。 2、由于苏丹红样品的前处理过程中没有纯化的步骤，觉得也许是锥孔脏了的缘故，所以把锥孔拆下来清洗，
峰面积又略有上升到12000-15000。 3、调出10天前的MS TUNE文件与现在的做对比，把一些被修改过的参数都改成10天前的数值，峰面积没有很
大的变化。 4、氯霉素样品很稳定，放10天应该不会分解那么多的，但是为了确保万一我又重新配了一瓶氯霉素，峰面积
仍然没有变化。 5、发现质量数似乎有偏移，又做全扫描和碰撞能量优化，发现质量数偏了0.3，修改过来后，峰面积也没多
大起色。 6、拿了一根老的Atlantis柱子测试了一下，峰型差了不少，峰面积略有降低。 这几天工作搞得我火大了，于是就帮他们搞了几天青霉素和苏丹红。有一天晚上我们让纯乙腈冲柱子一个晚
上，第2天早上惊奇第发现峰面积恢复到了20000-25000的水平。那天在我实验的中途，插进了几个青霉素样
品，用了一下酸性乙腈，然后我大略用纯乙腈冲了下柱子后，峰面积降低到了6000，证实了酸性物质确实对
氯霉素有影响。晚上继续用乙腈冲，隔天早上看，峰面积仍然在25000的水平。 7、当初峰面积从5万跳到10万是洗了一下RF LENS 1的缘故，所以我死磨硬缠让主任同意再洗一下RF LENS 1
，但是洗了之后不见有好转。
到现在为止，除了预柱外，其他东西能换的都换了，能洗的也都洗了，可还没抓住峰面积减少的主要问题。
各位高手帮我看下，我还有哪些工作没做，或者可能哪些方面还是有问题，我可以再去尝试。 虽然说现在的LOD可以达到0.02，足以完成任务，可是总有一种很不爽的感觉，在这里拜托各位高手了。谁能
帮我搞好这问题，来杭州开会我请大家吃饭。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-12-8 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
讲了很多，但感觉没有讲到点子上去，如：
色谱条件：流动相组成，pH值，流速
ESI电离条件：正或负检测，各个部件电压
定量方式：SRM参数，CIA电压等
...... ......
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glass[使用道具]
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发表于 2014-12-8 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我估计是系统脏的问题。以我3个月操作的经验。：）
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xyw5[使用道具]
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发表于 2014-12-8 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
色谱条件，乙腈：水，剃度洗脱，剃度要不要也写上来呢？ 流速0.2ml/min 中性pH值
ESI 负 MRM检测 各个电压的话发在下面
Instrument Parameters - Function 1: Polarity ES- Calibration Static 1,Static 2 Capillary (kV) 4.00 -3.92 Cone (V) 70 -71 RF Lens 1 0.0 Aperture (V) 0.0 RF Lens 2 0.0 Source Temperature (癈) 150 149 Desolvation Temperature (癈) 350 348 Cone Gas Flow (L/Hr) 65 Desolvation Gas Flow (L/Hr) 447 LM 1 Resolution 12.0 HM 1 Resolution 12.0 Ion Energy 1 0.8 Entrance 10 27 Collision 0 17 Exit 12 30 Manual Gain Control CE Gain 0.5 LM 2 Resolution 12.0 HM 2 Resolution 12.0 Ion Energy 2 2.1 Multiplier (V) 650 -640 Collision Cell Pressure(mbar) 2.23e-3 Analyser Pressure (mbar) OFF
剃度洗脱如下
B是乙腈 D是水
The gradient Timetable contains 7 entries which are :
Time A% B% C% D% Flow Curve 0.00 0.0 25.0 0.0 75.0 0.200 1 0.10 0.0 25.0 0.0 75.0 0.200 6 10.00 0.0 60.0 0.0 40.0 0.200 6 10.10 0.0 100.0 0.0 0.0 0.200 6 12.00 0.0 100.0 0.0 0.0 0.200 6 12.10 0.0 25.0 0.0 75.0 0.200 6 20.00 0.0 25.0 0.0 75.0 0.200 6
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发表于 2014-12-8 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用waters液质多年,尤其当你样品为血样或其它复杂基质时,不要奇怪,这种现象几乎天天会发生,这种夜路我走多啦多啦,现在也能应付自如,几条建议,但愿有帮助:
1:不要以为waters公司工程师能帮上多大的忙,我不是说他们不厉害，其实我与周工、于工都熟，只是这种软问题往往与仪器维修无关，而这种问题的溯源往往牵扯到原理及设计未知点。
2、请查看我在液质论坛中“做血样时遇到若干问题，请教！！！”有关介质效应的阐述。我已经用实验证明了介质效应的主体并非介质，而与某些设计有关。
3、你如果想成为一名真正的色谱分析工作者，大胆拆仪器吧！前提是你必须了解仪器工作原理,相关元件的作用及相互关系,硬件结构的解破,元件易损程度等等等等,否则别找我算帐.
4 你下次出现这个问题时,什么都不要动,将ESI+不锈钢毛细管及tip头拆下来,用3%甲酸超声15min,如果没错,信号会急剧提高,如果有效,不要忘了请我吃饭.
5 遗憾的是,这种方法不能保证信号的维持要
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xyw5[使用道具]
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 小中大

楼上的介质效应我已拜读过，不过我所说的问题都是用标准品来做的，和介质效应应该没什么关系
拆毛细管的问题我现在去做，估计是前几天做苏丹红的缘故
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发表于 2014-12-8 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
氯霉素是负离子检测模式，加酸会影响信号强度，此外，你的锥孔电压和电离电压似乎都高了。锥孔电压太高会产生碎片，与正离子不同，负离子的电离电压太高信号强度也会降低。供参考。
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 小中大
我觉得是毛细管，堵了，或者污染了。
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xyw5[使用道具]
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 小中大
tune file 中为什么cone 电压设到70？高了吧！你们的gas flow 一直都设的这么小吗？
如果你发现质量数偏的话，最好做一次质量数校正。我们的Quattro Ultima Pt也经常发生质量数偏移的现象。
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 小中大
我做NITROFURAN也是这样，这仪器说不定什么时候标准的信号值就莫名奇妙的小了，进完标准再进样品，再进标准时，与进样品前的标准信号值也许会小10倍，基质影响太严重了。搞得我也很郁闷，整天跟它周旋
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