气相色谱

气相色谱做过几次甜蜜素，但是有几个问题一直没搞明白，请做过这个方法的说说你们是怎么处理的：

1  标准在第一法气相色谱法之前有一句“本标准检出限为4ug”，后面还有第二法分光光度法、第三法薄层色谱法，三种方法检出限都是4ug吗？
2  这个检出限4ug如果放在第一法气相法，怎么换算为样品中的检出限，也就是xx g/kg。

3  标准方法中液体样取20g直接处理，固体样取2g放在100mL水中之后取20mL滤液来做，两种样品检出限应该不同，大家是怎么处理的？
4  标准溶液是10mg/mL的，直接取这个做标准曲线吗？感觉浓度太高了，检出限很高。

5  标准方法中标准曲线的制备，说得很模糊，“将标准提取液进样1uL--5uL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线”，意思是进样1uL、2uL、3uL、4uL、5uL形成标准曲线吗？ 这样做标准曲线好象不合适吧？

甜蜜素国标GB/T5009.97-2003的内容：

食品中环己基氨基磺酸钠的测定

1 范围

本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠的三种测定方法— 气相色谱法、比色法、薄层层析法。

本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸钠的测定;薄层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环己基氨基磺酸钠的含量测定。

本标 准 检 出限为4ug.

第一法气相色谱法

2 原理

在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酷，利用气相色谱法进行定性和定量。

3 试荆

3.1 正己烷。

3.2 氛化钠。

3.3 层析硅胶(或海砂)。

3.4 50g /L亚硝酸钠溶液。

3.5 100g /L硫酸溶液。

3.6 环己基氨基磺酸钠标准溶液(含环己基氨基磺酸钠，98%):精确称取1.00 00 g 环己基氨基磺酸钠，加人水溶解并定容至100 mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠10 mg,

4 仪器

4.1 气相色谱仪:附氢火焰离子化检测器。

4.2 旋涡混合器。

4.3 离心机。

4.4 10p L微量注射器。

45 色谱条件

4.5. 1 色谱柱:长2。，内径3 mm,U形不锈钢柱。

4.5.2 固定相:Chromosorb W AW DMCS 80目~100目，涂以10%SE-30,

4.5.3 测定条件

柱温 :80 0C;汽化温度:1500C;检测温度:1500C。

流速 :氮 气40m L/min;氢气30m L/min;空气300m L/min,

5 试样处埋

5.1 液体试样:摇匀后直接称取。含二氧化碳的试样先加热除去，含酒精的试样加40 g/L氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样

5.2 固体试样:凉果、蜜饯类试样将其剪碎制成试样。

6 分析步致

6.1 试样制备

6.1.1 液体试样:称取20.0 g 试样于100m L带塞比色管，置冰浴中。

6.1.2 固体试样:称取2.0 g 已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶(或海砂)研磨至呈干粉状，经漏斗倒人100 mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中。加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试样，准确吸取20 mL于100 mL带塞比色管，置冰浴中。

6.2 测定

6.2.1 标准曲线的制备:准确吸取1.00 m L环己基氨基磺酸钠标准溶液于100m L带塞比色管中，加水20mL。置冰浴中，加人5 mL 50 g/L亚硝酸钠溶液，5 ml. 100 g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30 min，并经常摇动，然后准确加人10 mL正己烷,5 g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1 min(或振摇80次)，待静止分层后吸出己烷层于10 mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升己烷提取液相当1 mg环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样1uL--5uL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。

6.2.2 试样管按6.2.1自“加人5 mL 50 g/L亚硝酸钠溶液⋯⋯”起依法操作，然后将试料同样进样1uL--5uL,测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量。

7 结果计算

见 式 (1 )

2222222.jpg (8.26 KB)

2010-11-28 15:49

式 中 :

X— 试 样中环己基氨基磺酸钠的含量，单位为克每千克(g/kg);

m— 试 样质量，单位为克(9);

V 进 样体积，单位为微升(KL);

10— 正 己烷加人量，单位为毫升(mL);

M, - 测定用试样中环己基氨基磺酸钠的质量，单位为微克(fig)o

计 算 结 果保留两位有效数字。

8 精密度

在重 复 性 条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

针对第二个问题，检出限有两个表达方式，一个是最小检出量，一个是最小检出浓度，中间有个进样体积的换算，把进样体积算进去，计算一下浓度 就可以了

第五个问题，标准曲线通常是配制不同浓度的标样，进相同体积，而标准上说的是进不同体积（姑且认为是这个意思）、这种做法没做过，不知道线性是否会好？另外进1微升到5微升 浓度差别有点小，范围有点窄吧？

楼主的最后一个问题存在理解错误；标准的意思是根据仪器的响应自主调节进样量1-5uL，并非标准曲线。

同意楼上，这句话的意思是先配好几个浓度点，然后自由选择进样量。

做过几次甜蜜素，但是有几个问题一直没搞明白，请做过这个方法的说说你们是怎么处理的：
1  标准在第一法气相法之前有一句“本标准检出限为4ug”，后面还有第二法分光光度法、第三法薄层色谱法，三种方法检出限都是4ug吗？
不太清楚后面两个方法的检出限，我也只用过第一个方法。

2  这个检出限4ug如果放在第一法气相法，怎么换算为样品中的检出限，也就是xx g/kg。
个人理解这个值是按照标准的称样量时，样品中含有的最低含量。

3  标准方法中液体样取20g直接处理，固体样取2g放在100mL水中之后取20mL滤液来做，两种样品检出限应该不同，大家是怎么处理的？
两种样品的检出限肯定不一样。一个有分取，一个是全量。
4  标准溶液是10mg/mL的，直接取这个做标准曲线吗？感觉浓度太高了，检出限很高。
甜蜜素响应不高，这个浓度点1mg/ml不大。

绝大多数国标方法在用标准曲线法的时候，都会说明曲线上各点的浓度，这个方法没有说明，各浓度点要自己定。
这样的话，随意性比较大，不同的人曲线不同，标准点的数量有多有少，标准点的浓度可高可低，如何保证检出限为4ug呢？质量控制也不好做呀。


就是因为“本标准检出限为4ug”出现在标准的总论部分、三种方法之前，才会产生以上种种疑问。而且第一法气相色谱法又有两种样品处理方法，这4ug放在哪里计算才是正确的呢？

第五个问题：我试着做过，线性没有问题。  只是进样体积增大后溶剂峰也增大，用填充柱的话，溶剂峰托尾严重，影响样品峰。
标准中没有说明标准点怎么取，范围窄点也可以吧，能涵盖卫生标准限量就行。

第二个问题：我是这样算的：假设标准方法中给出的最低检出量4ug，是进样1uL时检出的，则正己烷中“甜蜜素”含量为4ug/uL，即4mg/mL，10mL正己烷萃取液中含有“甜蜜素”40mg，也就是萃取前20mL样品溶液中含有40mg甜蜜素，当样品为固体时，100mL样品溶液中含有甜蜜素200mg，这 200mg甜蜜素是从2.00g样品中溶解出来的，则固体样品中甜蜜素的含量为100mg/g，即100g/kg，这就是最低检出浓度。
但是这个值也太高了吧？卫生标准限量是固体样0.65g/kg。
反复算了很多遍，找不出问题出在哪里，还请做过这个项目的指点迷津。

国标方法是这样：6.2.1 标准曲线的制备:准确吸取1.00 m L环己基氨基磺酸钠标准溶液于100m L带塞比色管中，加水20mL。置冰浴中................

方法中指明取1.00mL标准溶液，而且前面配制的标准溶液只有10mg/mL的一个溶液，这样只能做一个标准点，怎么能形成一条标准曲线呢？

如果是做一系列点，方法中应该是取一系列体积的标准溶液，而不应该只说取1.00mL这一个体积的。

如果我取一系列体积，做一系列点，算不算偏离标准方法？要不要验证呢？

个人理解这4ug应该是指样品中含有这个量就可以检出。对应的是称样量。

柱温要低一些，否则溶剂峰还没出完组分就出峰了。

这种方法在摸方法的时候用到过一次，当时图省事，少配样品，就像阿宝所说，浓度范围有点窄。但是有的时候进样量还超出了柱子的最大进样量，所以不提倡这样做。