小中大美国标准如下
assay-
pH 4.5 Phosphate buffer(0.05M)- Dissolve 6.805g of monobasic potassium phosphate in1000ml of water.
Mobile phase -prepare a filtered and degassed mixture of acetonitrile and pH 4.5 phosphate buffer(0.05M)(65:35).adjust with phosphoric acid to a pH of 4.7,and mix.
翻译：取磷酸二氢钾6.805g 溶于1000水中，配成磷酸二氢钾溶液。 流动相：乙腈：磷酸二氢钾溶液（65：35），用磷酸调PH到4.7.
chromatographic system
chromatograph is equipped with a 205nm detector and a 3.9-mm*30-cm column that contains 10-um packing L8. the flow rate is maintained at about 1ml per minute. then change the composition linearly over the next 20 minutes to a mixture of 65% acetonitrile and 35% water. elute 100ml of this mixture,then change the composition liinearly over th following 20 minutes to 100% mobile phase, and allow chromatography to proceed for about 3 hours.chromatograph the resolution solution, and record the peak responses as directed for procedure: the resolution, R,between crotonoylbetaine(levocarnitine related compound A)and levocarnitine is not less than 1.0
翻译：波长205nm，氨基柱3.9mm*30cm，L8，流速1.00ml/分钟，用乙睛洗脱50ml，乙腈：水（65：35）20分钟，然后用流动相平衡20分钟以上，整个过程3小时。
我改过：1。流动相乙腈：水（75：25），跑不出来。
2.PH调过2.5，峰是粘的，分不开。
3.现在怀疑是不是柱已经不能用了。柱的问题。
4.柱温也调过，不变。
关于用水溶还是用甲醇溶的问题，我已经试过对照品，没有任何问题，两种溶剂包括乙醇都用过，都可以跑出对照品，现在就是样品怎么出来。
关于为什么要提取，因为咖啡是过滤不了的，如果直接用水溶，柱就肯定很惨。咖啡不溶甲醇，所以直接用甲醇提取，过滤并进样。
关于用C18柱，也做过，不行，所查阅的文献资料不起任何作用。
