PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】引物二聚体怎么会这么亮？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 16  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】引物二聚体怎么会这么亮？

HP007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74166
精华 0
积分 446
帖子 612
信誉分 100
可用分 3833
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
1

发表于 2015-1-13 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】引物二聚体怎么会这么亮？

这是我跑的cox亚基2的，最后两个条带中在近第四条marker处有目的条带，很暗，前面三个都有很明显的非特异性扩增，想请教，这引物二聚体为什么会这么亮？比特异性和非特异性的都亮呢？求解答啊~~~~
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
2

发表于 2015-1-13 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么跑出了那么多条带？
归根结底可能还是引物不行吧
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
3

发表于 2015-1-13 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最大的问题是你的引物设计的不行！你可以在NCBI上把引物BLAST一下！看看你引物怎么样？
顶部
yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
4

发表于 2015-1-13 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用DNAstar检查下引物二聚体等情况
顶部
pou[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72980
精华 0
积分 408
帖子 496
信誉分 100
可用分 3311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
5

发表于 2015-1-13 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物量大吧，减少用量试试，另外，你的模板也要确保无误。
顶部
chuntian1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76393
精华 0
积分 421
帖子 522
信誉分 100
可用分 3423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
6

发表于 2015-1-13 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物设计的不好吧！
顶部
3N4G[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74178
精华 0
积分 408
帖子 536
信誉分 100
可用分 3461
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
7

发表于 2015-1-13 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先做个单引物验证试试
顶部
wiwi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72948
精华 0
积分 466
帖子 612
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
8

发表于 2015-1-13 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物和模板都有问题，你可以先把模板用宽梳子跑电泳将目的已经回收纯化后，在重新用引物扩增看看  如果还不行就重新设计引物了。
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
9

发表于 2015-1-13 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物的量多了，你看，其实你有目的条带
顶部
fangxiang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71737
精华 0
积分 380
帖子 479
信誉分 100
可用分 3151
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-30
状态 离线
10

发表于 2015-1-13 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做个单引物检测，可能单引物会出现你的非目的条带。
顶部
 16  1/2 12››