【求助】求围观

PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求围观

13 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求围观

966735obeng[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 108887
精华 0
积分 223
帖子 165
信誉分 100
可用分 1528
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-1-13 11:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的片段是957bp,可是总是扩到另一条大约750bp大小的带，阴性对照也扩到了，郁闷呀！
左图为taq酶扩增的结果，右图为pyrobest酶扩增结果：从左到右分别为8000marker,样1，样2，水对照。

rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态离线

发表于 2015-1-13 11:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

扩增体系有污染，可能是水、Buffer、dntp或引物

966735obeng[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 108887
精华 0
积分 223
帖子 165
信誉分 100
可用分 1528
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-1-13 11:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 rxcc33 于 2015-1-13 11:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
扩增体系有污染，可能是水、Buffer、dntp或引物

我也是这样怀疑，引物新的，水、Buffer、dntp也换了，可是结果还这样啊，难道是引物设计的问题？可是在基因组上引物的结合位点是特异的呀。

小游abc[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 108891
精华 0
积分 256
帖子 231
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-1-13 11:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

升高温度

eric930[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2015-1-13 11:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是引物的问题会不会是你的目的条带中央有引物结合位点我以前也遇到这样的情况就是中段有总是扩出小条带
但是还要注意如果跟别人混用试剂也很麻烦不知道会出现什么结果

9妖9[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 118114
精华 0
积分 226
帖子 172
信誉分 100
可用分 1646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-10
状态离线

发表于 2015-1-13 11:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是这样怀疑，引物新的，水、Buffer、dntp也换了，可是结果还这样啊，难道是引物设计的问题？可是在基 ...

========================================

那就可能是PCR的事。难不成能形成很大的引物二聚体？

tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态离线

发表于 2015-1-13 11:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

特异性不够好或者是污染
特异性问题可以靠改变引物，改变温度和巢式PCR来解决
体系的污染除了你提到的那些以外，酶也是可能被污染的，不妨也检查下

panda王[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 72140
精华 0
积分 852
帖子 1444
信誉分 100
可用分 7919
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态离线

发表于 2015-1-13 11:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

关于用水也能扩出条带的问题，我个人建议你到别的实验室借枪用一下，看看还能不能扩出来了。其他的那些污染基本都不可能，只有枪在多次吸打液体尤其是PCR扩增产物用枪洗打之后很容易有一部分气溶胶存在于枪里。
我曾经为这事非常头疼，后来发现是枪的问题。

ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态离线

发表于 2015-1-13 11:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

问题是水的同样也出了，那就说明水或者能够接触水的你使用的东西有问题啊，条带的大小不对那就得看你的引物和模版了。
但是从一二对照来说，条带准确；单从2图来看，也只是多出了水对应的那个条带，但是一号明显更浓，说明一号的污染源最多，但是这个污染源是从何而来，就得在分析了，但是应该不是水里来，因为要是在水里，只能一样；可是从一图来看，有可能是水里的。
那么就有一个设想，你的模版或者溶解模版的溶液，或者你的枪头污染
这只是样一样二是同一个东西来说，哎，还是自己一个一个的排除吧，把pcr所需的所有元素，每次只变一个元素，确保变的这个安全，最后找出答案。模版也得算上

vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态离线

发表于 2015-1-13 11:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

换进口的PCR管，戴口罩再试一次。你这个是明显的污染。

13 1/2 1 2 ››