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标题:【求助】请教大家pcr电泳图

orangecake[使用道具]
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发表于 2015-1-13 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教大家pcr电泳图

本人刚刚接触分子实验，下面是我用两种引物跑的pcr图，是同科的22种不同植物的pcr图片，我想请教大家的是：
为什么我的条带好像太宽了，不够细长，有些条带太宽导致相邻的条带黏在一起，影响读带，做了好多能扩增出来的引物都是这样子，而且体系优化后也是这样，我的胶浓度是1.5%的。迫切希望得到大家的帮助，谢谢大家！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2015-1-13 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的是issr标记，我模板的量大多在60ng左右，体系用的是takela的试剂，迫切希望得到帮助
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2015-1-13 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是跟胶的浓度有关？你的胶浓度较高啊，是分离小片段的吧。我也是新手，只是考虑到这里了，希望对你有帮助。
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发表于 2015-1-13 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我跑了很多聚丙烯酰胺的胶，都是8%的浓度，52孔的，带型很漂亮
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cocacola[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
亮度一定程度反映了浓度，你要是有功夫就得优化PCR，让各个引物产物平衡一点。没功夫就少上点样就行了，曝光再调低点，能基本看清楚就行了。你看现在的marker也很亮，1.5的胶浓度差不多
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orangecake[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 cocacola 于 2015-1-13 15:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
亮度一定程度反映了浓度，你要是有功夫就得优化PCR，让各个引物产物平衡一点。没功夫就少上点样就行了，曝光再调低点，能基本看清楚就行了。你看现在的marker也很亮，1.5的胶浓度差不多 ...

谢谢您，我的上样量是10微升，我就是想得到那种根根分明的条带，好像我的条带还有点模糊，有点弥散啊，是怎么回事呢？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到过同样的情况 一般我考虑引物不特异 扩出 很多杂带 还有就是提高退火温度 让杂带减少 你的还可以看出有杂带 我的测序才知道有杂带 慢慢来 先优化看看 祝你好运 实验就是这样 加油！
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vera+[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提高退火温度，减少非特异性条带；增加胶浓度或转用PAGE胶；减少上样量5ul试试。祝好运……
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october7[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非特异性扩增太多了吧
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pou[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非特异太严重了啊 都跑出Marker了
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