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标题:【求助】PCR结果在目的条带区弥散

babybabe[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR结果在目的条带区弥散

我的目的条带 长度为80bp左右，最左边的是MARK，右边的都是样品，mark最小为50bp,目的条带应该在倒数第二个带之间，但是，现在一直是弥散的，不知道为什么！请各位高手指教一下！非常感谢！
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个听其他老师提过，如果不是模板质量问题，那就是引物不好。
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babybabe[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

模板质量应该没问题吧，因为我扩其他的都能扩出来，引物方面不好改，因为我扩的是miRNA本身就很短
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babybabe[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2015-1-13 15:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这个听其他老师提过，如果不是模板质量问题，那就是引物不好。

你们老师当时是怎么说的啊？能否具体给我讲一下为什么会出现这种情况，有没有更好的解决方法，可否进行二次PCR解决，因为模板浓度肯定很低！
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量，减少循环次数
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babybabe[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好的！再试试！非常感谢！因为miRNA 的扩增本来就不好做，原因太多了！
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发表于 2015-1-13 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好的！再试试！非常感谢！因为miRNA 的扩增本来就不好做，原因太多了！
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是酶不好，我扩一个一百左右的片段刚开始也是各种不好，换了支酶就好了。可能把胶的浓度加大一点也有助于条带集中
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wiwi[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为原因主要在于你的条带太小了，跑电泳基本是看不出来，条带会非常弱，有的时候我仔细看会有疑似条带，这样就可以直接往下做测序看看
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nn255[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这应该是引物子连吧……再者，你的目的片段太小了。加到载体上，用载体的引物P一下试试
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