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标题:【求助】相同模板、引物、条件，隔一个月后PCR就...

fox_79[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】相同模板、引物、条件，隔一个月后PCR就...

如题，我是-20°保存的组织样DNA样品，跑微卫星的引物，之前的结果如下图

一个月后相同条件再跑，就成这样了


各位有遇到相同情况的吗？
是怎么解决的呀？
急~~~谢谢！

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douding66[使用道具]
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发表于 2015-1-13 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
貌似DNA降解了。DNA溶解液里加RNase I试试
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rfv[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
点一下DNA检测一下。如果DNA没事，那就注意下扩增仪是不是同一台，有时候孔温略有不同会影响扩增。
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fox_79[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真的有降解，好奇怪啊，在冰箱里放着也很少冻融的，怎么会降解呢？
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fox_79[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 rfv 于 2015-1-13 16:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
点一下DNA检测一下。如果DNA没事，那就注意下扩增仪是不是同一台，有时候孔温略有不同会影响扩增。

真的有降解，好奇怪啊，在冰箱里放着也很少冻融的，怎么会降解呢？
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fox_79 于 2015-1-13 16:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

真的有降解，好奇怪啊，在冰箱里放着也很少冻融的，怎么会降解呢？

DNA提取好之后，为什么要测260/280的原因就在这了，提取的DNA中的蛋白质可能有DNA酶活性，DNA即使保存在-20也会被降解。另外260/230也要注意，盐残留对后续芯片质谱有影响。
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fox_79[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ladyhuahua 于 2015-1-13 16:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

DNA提取好之后，为什么要测260/280的原因就在这了，提取的DNA中的蛋白质可能有DNA酶活性，DNA即使保存在-20也会被降解。另外260/230也要注意，盐残留对后续芯片质谱有影响。 ...

哇。这样啊，以前都不知道，谢谢哦。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真的有降解，好奇怪啊，在冰箱里放着也很少冻融的，怎么会降解呢？

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提取DNA的时候要在洗脱液里加RNase I。原因是：残留的RNA有些核酸酶会降解DNA。我们实验室的使用方法是将RNase I 100℃煮一下加到洗脱液里，也可以加到CTAB里。祝实验顺利！
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