【求助】AFLP-貌似预扩增正常，选扩产物从加样孔开始弥散

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标题:【求助】AFLP-貌似预扩增正常，选扩产物从加样孔开始弥散

kulee[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

左边为预扩，右边为选扩）
最近在做鱼类的AFLP，做到预扩增都比较正常，可是选扩结果如图（从加样孔开始弥散），我筛选几十对选扩引物都是如此，求解！

join[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是降解了啊

kulee[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 join 于 2015-1-13 16:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是不是降解了啊

不知道你说的是DNA降解还是选扩产物降解？首先，我确定DNA质量很好，其次选扩产物是PCR跑完马上电泳，不存在降解问题！

join[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 kulee 于 2015-1-13 16:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

不知道你说的是DNA降解还是选扩产物降解？首先，我确定DNA质量很好，其次选扩产物是PCR跑完马上电泳，不存在降解问题！

会不会是引物特异性太差，扩出了多种片段，另外也不能排除胶的问题呀

mamamiya[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你酶切什么条件

kulee[使用道具]
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发表于 2015-1-13 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

问题已解决，原因是连接酶BUFFER里面的ATP降解了，接头连接不好，导致选扩片段偏大。以下是64对引物筛选图

kulee[使用道具]
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