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标题:【求助】如何提高目的产物和降低二聚体及其他非特...

eor[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何提高目的产物和降低二聚体及其他非特...

大家做pcr过程中有没发现有的基因扩增过程中总是会遇到目的产物条带时亮时暗，而二聚体却总是很亮的情况。假设前提是引物已经被限定了，这样的扩增体系如何优化。

现在大家做到PCR的时候还会使用稳定剂吗？在此种情况下哪种稳定剂会有比较突出的效用？

谢谢！
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panda王[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种情况有遇见过，试过不少方法也没解决，还请高手指教
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没办法，我只能在PCR产物纯化时候想办法了，用柱子纯化比纯化酶效果要好一些，试了一下，柱子纯化后已经没有引物二聚体了
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uaubc[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好苦恼，我现在的实验就是这样，扩不出来
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qqq111[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PCR扩增，引物最为重要，引物不行是硬伤！既然，引物不能换了，其他方法只能算权宜之计。
但也有一些优化的方法：
1.减少循环数，可以相对减少非特异性扩增；
2.引物浓度可以适当减低，减少二聚体；
3.Mg2+浓度不要过高；
4.适当提高退火温度；
5.确保体系中的各成分不被污染，操作当然也很重要。
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.减少循环数，可以相对减少非特异性扩增；
2.引物浓度可以适当减低，减少二聚体；
3.Mg2+浓度不要过高；
4.适当提高退火温度；
5.确保体系中的各成分不被污染，操作当然也很重要。
就是这样子弟
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