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标题:【求助】TaKaRa的EX Taq HS 与LA酶哪个保真性高？

qqq111[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】TaKaRa的EX Taq HS 与LA酶哪个保真性高？

请大家看看我的图，
图3 LA酶产物有两条带（1.8的胶 进口机器拍的）
图2 LA酶产物似乎也有两条带（1.0的胶 国产机器拍的）
EX酶产物已经拿去测序了 已测出两段了

请问大家EX Taq HS 与LA酶哪个保真性高呀？产生两条带 会不会是降解或者本来就扩出两条带了？谢谢!
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fangxiang[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想问下你的LA和EX 酶用的PCR体系分别是什么？跟TAKARA说明书上用的体系一样的吗？
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有分离距离更大的跑胶结果么?

LA是高保真和Ex的混合物,理论上应该比Ex保真性要高.
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loli[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LA反应体系 25UL
LA Taq（5U/UL） 0.3
10*LA PCR Buffer 2.5
dNTP(10mMol) 1
模板 1
F 0.5
R 0.5
ddH2O 19.2

EX体系 25
LA Taq（5U/UL） 0.3
5*EX PCR Buffer 5
dNTP(10mMol) 1
模板 1
F 0.5
R 0.5
ddH2O 16.7

模板浓度1.125ug/ul

图3是用1.8的胶跑的 我试试更大的胶看看
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join[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想一次扩8kb的片段，体系应该怎样设
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leifengta[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然LA的高，都不用问
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flower@@[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 leifengta 于 2015-1-13 17:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
当然LA的高，都不用问

我还是习惯用EX 扩不是很长（5k以上）的片段！
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any333[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
适合扩增长片段并高保真的酶很多，为什么这么执着在TAKARA的这两个酶上？5kb也不算是特别长。LA含有Pfu，由于Pfu的执行性较低，所以有时候扩增的特异性不是很高，通常LA适合想偷懒不加A直接做TA克隆，因为大约不到1/3的产物会有A突出末端。你的图里有LA扩增有非特异性扩增不算奇怪
但LA的保真度并不高，以前实验室内用LA做克隆曾经一个月内挑到3个有突变的克隆子，更不要说EX了，如果只是看下条带还好说（检验好像也不需要扩这么长），做克隆用这个结果很难保证
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
pfu ultra2...
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