【求助】双酶切出来的片段比我的目的片段大

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标题:【求助】双酶切出来的片段比我的目的片段大

koook5695[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这是我连18T载体和28a载体的图但是我的目的条带只有720左右的bp 并且我用质粒做了pcr 条带也在720 但酶切的产物却在750处什么原因啊急！！

rxcc33[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

貌似720和750从电泳图上看也分不了那么清吧~

pulala[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

确定吗？30bp的差别可以准确看出来吗？

join[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

没事的，一般都会有误差，应该是正确的，直接拿去测序即可，或者菌液pcr，直接用你设计的原核表达的带酶切位点的引物p。

koook5695[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 join 于 2015-1-13 17:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
没事的，一般都会有误差，应该是正确的，直接拿去测序即可，或者菌液pcr，直接用你设计的原核表达的带酶切位点的引物p。

测序不正确只有30%多的一致性我问过别人有人怀疑说是连接上非特异性片段了

koook5695[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 koook5695 于 2015-1-13 17:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

测序不正确只有30%多的一致性我问过别人有人怀疑说是连接上非特异性片段了

那就是引物特异性的问题了

koook5695[使用道具]
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发表于 2015-1-13 17:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大