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标题:【求助】为什么菌落PCR跑出来的条带不一样呢？

韩梅梅[使用道具]
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发表于 2015-1-14 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么菌落PCR跑出来的条带不一样呢？

做的菌落pcr，为什么跑出来的条带每条都不尽相同呢？而且只有第一条是我要的目的片段。
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小游abc[使用道具]
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发表于 2015-1-14 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.作连接的时候PCR产物条带如何?是纯化过的吗?
2.板子上菌落是明显的单斑吗?
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nn255[使用道具]
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发表于 2015-1-14 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
难道你电泳时先跑反了，然后又正过来的？
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junhun[使用道具]
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发表于 2015-1-14 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我原来也出现过这样的情况，很有可能是你转化不成功，引物与菌的DNA序列发生非特异性的结果
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2015-1-14 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好奇怪！建议再做一次看看
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uuooii[使用道具]
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发表于 2015-1-14 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多长的基因
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发表于 2015-1-14 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们老板一向讨厌PCR检测阳性菌斑，因为这个技术太不稳定，各位应该都有体会，还是把菌摇起来，提质粒做酶切比较靠谱
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youreyes[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们老板一向讨厌PCR检测阳性菌斑，因为这个技术太不稳定，各位应该都有体会，还是把菌摇起来，提质粒做酶切比较靠谱
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

假阳性是有的，可能是你扩增体系的不好或者污染了。建议重新做一次。
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qiangren789[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
菌落pcr 还是不太稳定，本身整个菌体作为模板比较复杂
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