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标题:【求助】各位大虾求助 帮忙看看这个梯度PCR结果

wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】各位大虾求助 帮忙看看这个梯度PCR结果

梯度的结果， 目的条带大概250bp（从下至上第一条带）， 原本的Tm在60度左右 但是温度从55到68 一直都只出现两条带； 从RNA合成cdna 用的random； 请问这个问题怎么解决呢？？ 我可以只取目的条带来分析么，急切知道答案。谢谢各位了！
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
新手也不太懂 是不是引物污染了呢
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
嗯，引物有换过 也换过其他的引物 结果都一样：（
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cocacola[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重新设计引物吧。一直能扩出两条带，说明引物的特异性不好，重新设计一条特异性高的引物看看。
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cocacola[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物特异性不好，如果不想重新设计引物的话，胶回收的时候只用目的片段大小的也行
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dodoit[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果做表达分析，必须重新设计了。如果克隆基因，可以只回收目的带测序看看。
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dodoit[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外应该做个单引物对照。
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eric930[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
目的条带回收测序看一看吧！
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nn255[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

作各种对照可以解决相关问题。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实干脆全部建克隆,不同长度的都送去测序,看是不是有自己的目的片断,只要能得到结果也可以了.看起来引物的特异性确实有问题.
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