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标题:【求助】跪求解答

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发表于 2015-1-14 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】跪求解答

这是我鉴定T载体与我目的片段连接的pcr结果图，但是正常应该是一条带呀但现在怎么这么多带那，之前的胶回收的目的片段也是一条带呀现在跪求高手指点
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
信息太少，用的什么引物做的什么的PCR，引物的特异性怎么样，片段PCR的时候有没有杂带，挑的菌落是单克隆吗，自连的T载体会不会P出条带，片段大小
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
考虑下引物的特异性！
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IAM007[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物特异性不好，是M13引物吗？提高点退火温度哦
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leifengta[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你PCR模板是用质粒吧，模板量太多了，电泳图中除了你目的带还有质粒
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leifengta[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你PCR的模板是质粒么？是不是模板量加多了，最后电泳时除了目的条带还有质粒。
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发表于 2015-1-14 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
特异性非常好，在做pcr时就一个条带。模板就加了0.2ul，挑的是单菌落
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TNT[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的目的片段是2885bp，
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发表于 2015-1-14 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

t载体自连不会出的
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