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标题:【求助】帮忙分析下PCR结果吧！

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 小螺号 于 2015-1-14 16:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
从电泳条带来看，不知道你目的产物片段大约是多少，如果较大的话，那么最前面不到100bp的应该是引物二聚体， ...

=================

目的条带为1468bp


其实你的菌液鉴定结果应该基本都是阳性，Marker2000  1000--2000之间的若隐若现的带应该就是，但是目的带太弱了，二聚体太强，可以把引物的量减半，模板增加一些。试试、
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小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 shenkunjie 于 2015-1-14 16:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


其实你的菌液鉴定结果应该基本都是阳性，Marker2000  1000--2000之间的若隐若现的带应该就是，但是目的带太弱了，二聚体太强，可以把引物的量减半，模板增加一些。试试、 ...

您好，我可不可以直接用PCR产物做模版，在跑一次PCR，谢谢！
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
目的条带为1468bp

===========================================================================================================

这样的话就可以肯定，你的目的片段没有P出来，给你两个建议：
1、确认template的浓度以及纯度
2、调整反应体系以及反应条件，做几个梯度看看，说明书上的都是理论的东西，实际操作过程中，会受到很多因素的干扰，所以说明书只能做一个参考，只有自己在实验过程中得到的数据才是最真实的。
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小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yjf1026 于 2015-1-14 16:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
目的条带为1468bp

===========================================================================================================

这样的话就可以肯定，你的目的片段没有P出来，给你两个建议：
1、确认template的浓度 ...

您好，您说的做几个梯度是指什么梯度？具体说下吧，谢谢！
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
目标条带分子量有点大，可采用其他PCR产品
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小螺号[使用道具]
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发表于 2015-1-14 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 qhyu 于 2015-1-14 16:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
目标条带分子量有点大，可采用其他PCR产品

其他PCR产品,能不能再指明点，谢谢！
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-1-14 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就是有些PCR试剂盒嘛~~最普通的只是1000bp以内，中等的是1000至3000bp，长的3000以上~~具体好像罗氏的也有~~高保真之类的。。。不过你先试试最普通的啦~~
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qiangren789[使用道具]
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发表于 2015-1-14 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实你的菌液鉴定结果应该基本都是阳性，Marker2000  1000--2000之间的若隐若现的带应该就是，但是目的带 ...

=================================================================================

不一定吧，如果我转化进感受态的话，假阳性是很多的~~那时郁闷死我，还好~~我只要一个阳性细菌就好了~
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u76mp[使用道具]
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发表于 2015-1-14 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一看跑出来的胶图片就知道你挑的菌落全部是阴性。。。。如果你的引物没有问题的话，还有模版加1微升就足矣！！
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2015-1-14 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物已经形成二聚体了，丢那星星
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