【求助】氨基酸含量测定

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标题:【求助】氨基酸含量测定

call[使用道具]
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发表于 2015-1-17 23:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家好，有个问题向大家请教，我在测定蛋白中的氨基酸含量，我查了查有好四种柱前衍生方法，分别为异硫氰酸苯酯（PITC）法、6-氨基喹啉－N－羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）法、邻苯二醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）法、2，4-二硝基氟苯（DNFB）法，我不清楚每种衍生方法的适用范围，所以不知道该选择哪一种衍生试剂？我的氨基酸有甘氨酸，丙氨酸，赖氨酸，谷氨酸，苯丙氨酸，谢谢啦！

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2015-1-17 23:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 call 的帖子

cuturl('http://img1.chem17.com/5/20090723/633839395905156250.pdf')
看看这个，应该对你有帮助

any333[使用道具]
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发表于 2015-1-17 23:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用过商业化的氨基酸分析柱（天津博纳艾杰儿），异硫氰酸苯酯（PITC）法，效果还好，标准品里有这五种氨基酸

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发表于 2015-1-17 23:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

商业化的氨基酸分析柱（天津博纳艾杰儿）什么价位啊，路过学习下！！！

eric930[使用道具]
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发表于 2015-1-17 23:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以用PITC法。。。操作简单，检出限低，我曾经做过检测限达到0.5ng级的。，线性很好，范围也很广，达到4个9。而且对于一二级氨基酸都可以反应。你上面提到的这几种氨基酸都可以和PITC反应。

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发表于 2015-1-17 23:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 eric930 于 2015-1-17 23:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可以用PITC法。。。操作简单，检出限低，我曾经做过检测限达到0.5ng级的。，线性很好，范围也很广，达到4个9。而且对于一二级氨基酸都可以反应。你上面提到的这几种氨基酸都可以和PITC反应。 ...

你好，你做过甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的PITC衍生化吗？

我做的甘氨酸衍生物有个肩峰，谷氨酰胺衍生物有两个峰。

色谱条件为：
柱子：Agilent SB-Aq 250mm*4.6mm, 5um
流动相A：50mM NaAC (pH=6.5)
流动相B：50mM NaAC (pH=6.5):ACN=1:1
Time:0-10-25-40min
B%:5%-5%-95%-95%
进样量10uL

请指教，谢谢！

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2015-1-17 23:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

AQC法肯定可以，我就是用AQC来衍生，能同时分析18种常见氨基酸。