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标题:【求助】纯化特异性抗体的方法

fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】纯化特异性抗体的方法

请问，特异性纯化IgG类抗体的方法有哪些？怎样利用特异性的抗原来纯化此类抗体呢？
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newway[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
过亲和层析柱吧。。。。。
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nn255[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一种亲和纯化基因免疫所产生的特异性抗体的方法，该方法包括： a)将带有特定基因和6×His的真核细胞表达质粒免疫动物，产生含有基因特异性抗体的血清或卵黄免疫球蛋白粗提物； b)将该质粒在体外转染真核细胞或制备原核表达质粒转化原核细胞，培养后将细胞裂解液加到金属离子螯合树脂柱，由于重组蛋白带有6×His片段，可以与树脂中的金属离子螯合，被吸附于树脂表面，制成亲和层析柱； c)在进行特异抗体亲和层析时，将含有基因特异性抗体的血清或卵黄免疫球蛋白粗提物加到亲和层析柱，特异性抗体与相应的抗原重组蛋白充分结合后，先洗掉非特异性的抗体和杂蛋白，最后洗柱收集基因特异性的抗体。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nn255 于 2015-1-21 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一种亲和纯化基因免疫所产生的特异性抗体的方法，该方法包括： a)将带有特定基因和6×His的真核细胞表达质粒免疫动物，产生含有基因特异性抗体的血清或卵黄免疫球蛋白粗提物； b)将该质粒在体外转染真核细胞或制备原核表达质 ...

请问常用的亲和层析柱填料包括哪些呢？对这方面还不太懂，希望多多指教
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hold住[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白A层析柱
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发表于 2015-1-21 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
抗体过亲和柱，常用的配基是proteinA,proteinG,新的还有proteinL,proteinLA,用的人还少。另外看你的抗体属性
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发表于 2015-1-21 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是兔抗体用proteinA好些，鼠抗用proteinG好些。GE公司有专门的纯化填料和预装柱卖，纯化效果不错，我们一直在用，现在他们预装柱5ml价格在5000了，有点小贵啊
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yysr238[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用proteinA预装柱（BSP095-1  BSP095-2）或proteinG（SF022-PG）
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douding66[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用的最多还是Protein A亲和层析柱，结合能力非常的强。只要一两ml，就可以纯化几十ml的抗血清，如果LZ需要的话，可以联系我，我可以提供给你一个我所用过的非常详细的纯化抗体的操作步骤。
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wawa[使用道具]
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发表于 2015-1-21 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，可以提供一下你“所用过的非常详细的纯化抗体的操作步骤”吗？迫切需要，谢谢
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