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标题:【求助】HPLC测试结果不一致，求解决方法

baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】HPLC测试结果不一致，求解决方法

各位大虾，

小弟刚刚从事HPLC实验操作，不曾就遇见了一个比较杯具的问题，请各位给与支持和帮助。

我现在在做一个T3，C18的反向柱HPLC实验，结果在实验过程中，开始测定标准曲线的一些列浓度测定，一直到中间靠后的样品时均出现类似图1 的峰型，结果进行到后期，就出现了类似图2的峰型，前后如果同时吸取一管样品，也会这样。

图1为标准曲线的其中一个浓度-500mM，在HPLC开始时测定，刚平衡好柱子进行的第二管样品(该样品前已做BLANK，均没有这种峰出现）。
出现峰型如图1
图2为同样该管样品，只是在我试验将要结束时又跑了该管样品一针，图形变化较大。

纠结了很久，实验也做过重复，均是一样的问题。
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
实验搞定， 试了很多方法，最后还是通过更换一下buffer，刚刚解决，还不知道是否稳定，先上来和大家分享一下，谢谢各位的帮助
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TNT[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你没说清楚，我觉得初步看是里面的两个成分。
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 TNT 于 2015-1-21 16:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你没说清楚，我觉得初步看是里面的两个成分。

不是两个成分，如果是未酶解的，是不会在这个位置出现峰的，只有加了相应的酶才会有峰出现
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
图一样品可能过载，也可能液相方法学耐用性低。
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 pengke1983 于 2015-1-21 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
图一样品可能过载，也可能液相方法学耐用性低。

图1与图2是从一管样品中吸取进样的，唯一不同的地方就是第一针在实验开始的时候，第二针在实验快结束的时候
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 baidukk 的帖子

第一针是否充分平衡？梯度还是等度？
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dior[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是样品溶液不稳定啊
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发表于 2015-1-21 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品降解了，所以前面出现其他杂质峰
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bohe221[使用道具]
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发表于 2015-1-21 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要么你跑到后面柱子比较脏了，这种问题我也遇到过，尤其如果是中药。也可能是你样品本身就不稳定。建议把柱子冲洗干净后再做一次，样品的测定不要间隔时间太远
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