生物制药 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】HPLC测试结果不一致，求解决方法

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标题:【求助】HPLC测试结果不一致，求解决方法

baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
使用流动相溶解样品，加上保护柱。进样阀注意要时常清洗。
重复进样看看。

=======================================================

流动相我的是低PH的，我怕会引起样品变性，不过也值得尝试一下，谢谢
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8s5g[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是开始没有平衡好？溶液稳定性试验做了没？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哈哈 这个问题我遇到过 说说我的经验吧 有好几个办法：调节进样量，换流动相（估计你用的是国产的） 调节流动相比例 必要时重新做标准溶液 ，还有一个是 你的标准曲线用流动相稀释看看效果等等很多办法吧 流动相的 ...

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我这个流动相很简单，是别人已经做出实验过的，就是单纯的水，用磷酸调节PH到2左右，，标准液我换过几次了，都是如此，而且阳性对照也是一样，实验到最后，不管是标液还是样品，还是对照，均出现想要的结果
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先要用流动相配药，
还有你的药物浓度是不是有点高了啊

=================================================================

嗯，我尝试一下用流动相配制标曲，浓度应该不是很高，我是有梯度的，从低到高都有的
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主你走BLANK没有出现怪峰，说明仪器系统没有问题。
从楼主的描述来看，最大的变量是时间。不知楼主你的样品稳定性如何，在试验过程中是否要求控温。

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没有特殊要求控温，我一般是进样器那边在8℃，柱温有一个，是柱子的要求，别的没啥了。
不过，我最近又试了一次，比如把前面做的一批样品，新进样一次，结果一模一样，也是开始时是m峰，后面变好，我纠结了
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发表于 2015-1-21 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品不稳定，降解了……
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1，我觉得可能是第一针进样时前一针有脏东西东西没洗出来，结果就进第二针了。从你的两个图型不一样就可以看出来，第二针主峰前面有一些峰，而第一针则没有，足以说明第一针是从中途开始记录信号的。
2，还有就是从出峰时间上看第一针的后面那个峰应该是你要的东西。你用的是不是同一根柱子。
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发表于 2015-1-21 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的样品可能不稳定，有可能是因为光照或者温度的影响，转化构型了，
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1，我觉得可能是第一针进样时前一针有脏东西东西没洗出来，结果就进第二针了。从你的两个图型不一样就可以看出来，第二针主峰前面有一些峰，而第一针则没有，足以说明第一针是从中途开始记录信号的。
2，还有就是 ...

==========================================================================================================

是同一根柱子 同时制备的样品 同时测的 唯一的不同就是第一针和第二针间隔的时间比较长，中间有别的样品。你说的第一针有脏东西的可能性不大，我不是连续两针，从整个实验的中间部分开始 所有的都变好了。
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2015-1-21 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为何不再进几针看看效果？
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